[發明專利]一種治療炎癥性腸病的益生菌復合物

有效

• 申請號: 201910246812.7
• 申請日: 2019-03-25
• 公開（公告）號: CN109758434B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 宋海星;羅曉明
• 申請（專利權）人: 成都醫學院
• 主分類號: A61K35/741
• 分類號: A61K35/741;A61K9/50;A61K47/36;A61P1/00
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種治療炎癥性腸病的益生菌復合物，其特征在于，它是先后用殼聚糖和海藻酸鈉交替包裹大腸桿菌Nissle 1917，再由鈣離子交聯處于最外層的海藻酸鈉后得到；所述包裹的總層數為大于2的偶數。

2.如權利要求1所述的益生菌復合物，其特征在于，所述包裹是將大腸桿菌懸液與殼聚糖或海藻酸鈉溶液混合，經孵育、靜置、富集菌體得到。

3.如權利要求2所述的益生菌復合物，其特征在于，它是由如下方法制備得到：

(1)準備菌液：取16～24體積份的大腸桿菌Nissle 1917懸液，富集菌體，3～6體積份的PBS重懸；

(2)殼聚糖包裹：將菌液與0.4～0.6體積份的殼聚糖溶液混勻，得混合液；在搖床中孵育7min以上，靜置3min以上，富集菌體，3～6體積份的PBS重懸；

(3)海藻酸鈉包裹：將菌液與0.4～0.6體積份的海藻酸鈉溶液混勻，得混合液；在搖床中孵育7min以上，靜置3min以上，富集菌體，3～6體積份的PBS重懸；

(4)依次重復步驟(2)和(3)，得包裹4層的菌體懸液；

(5)鈣離子交聯：將包裹菌體懸液與鈣鹽溶液混合，得混合液；靜置3min以上，富集菌體，即得；

步驟(2)所述殼聚糖溶液濃度為0.5～1.5mg/ml；步驟(3)所述的海藻酸鈉溶液濃度為1.5～2.5mg/ml；步驟(5)所述混合液中鈣離子終濃度為28～X mmol/L，其中X mmol/L為所述鈣鹽飽和溶液中鈣離子濃度；以上各步驟的搖床孵育溫度為25～39℃，搖床震蕩頻率為10～200rpm。

4.如權利要求3所述的益生菌復合物，其特征在于，步驟(2)所述殼聚糖溶液濃度為1mg/ml；

步驟(3)所述的海藻酸鈉溶液濃度為2mg/ml；

步驟(5)所述混合液中鈣離子終濃度為28～28.8mmol/L。

5.如權利要求1所述的益生菌復合物，其特征在于，所述大腸桿菌Nissle 1917在包裹時處在對數生長期。

6.一種治療炎癥性腸病的益生菌復合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)準備菌液：取16～24體積份的大腸桿菌Nissle 1917懸液，富集菌體，3～6體積份的PBS重懸；

(2)殼聚糖包裹：將菌液與0.4～0.6體積份的殼聚糖溶液混勻，得混合液；在搖床中孵育7min以上，靜置3min以上，富集菌體，3～6體積份的PBS重懸；

(3)海藻酸鈉包裹：將菌液與0.4～0.6體積份的海藻酸鈉溶液混勻，得混合液；在搖床中孵育7min以上，靜置3min以上，富集菌體，3～6體積份的PBS重懸；

(4)依次重復步驟(2)和(3)，得包裹4層的菌體懸液；

(5)鈣離子交聯：將包裹菌體懸液與鈣鹽溶液混合，得混合液；靜置3min以上，富集菌體，即得；

步驟(2)所述殼聚糖溶液濃度為0.5～1.5mg/ml；

步驟(3)所述的海藻酸鈉溶液濃度為1.5～2.5mg/ml；

步驟(5)所述混合液中鈣離子終濃度為28～X mmol/L，其中Xmmol/L為所述鈣鹽飽和溶液中鈣離子濃度；

以上各步驟的搖床孵育溫度為25～39℃，搖床震蕩頻率為10～200rpm。

7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，

步驟(2)所述殼聚糖溶液濃度為1mg/ml；

步驟(3)所述的海藻酸鈉溶液濃度為2mg/ml；

步驟(5)所述所述鈣鹽是氯化鈣，所述混合液中鈣離子終濃度為28～28.8mmol/L。

8.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于：

步驟(1)的體積份數為20；

和/或，步驟(1)、(2)或(3)所述的PBS體積份數是4；

和/或，步驟(2)的殼聚糖溶液的體積份數是0.5；

和/或，步驟(3)的海藻酸鈉溶液的體積份數是0.5。