[發明專利]一種5-氨基乙酰丙酸高產重組菌株及其用途有效
| 申請號： | 201910246577.3 | 申請日： | 2019-03-28 |
| 公開（公告）號： | CN110004164B | 公開（公告）日： | 2023-01-13 |
| 發明（設計）人： | 李維;葛方蘭;陳貴英;左勇;文冬梅;葛清蓉 | 申請（專利權）人： | 四川師范大學 |
| 主分類號： | C12N15/54 | 分類號： | C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峽;張娟 |
| 地址： | 610000 *** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 氨基 乙酰 丙酸 高產 重組 菌株 及其 用途 | ||
1.一種用于制備5-氨基乙酰丙酸的DNA片段，其特征在于：它包括表達hemA基因的單元A和沉默hemB基因的單元B；
所述單元A為SEQ ID NO.1所示的序列；所述單元B為SEQ ID NO.4所示的序列；
所述單元B包括hemB基因的反義序列；所述反義序列與hemB基因的起始密碼子上游-57nt到起始密碼子下游139nt的區間反向互補；
所述單元B的反義序列兩端含有序列C和序列D；所述序列C和序列D反向互補配對；所述配對末端序列長度為25~45bp；
所述單元A和單元B都帶有啟動子和終止子序列。
2.如權利要求1所述的DNA片段，其特征在于：所述配對末端序列長度為38bp。
3.如權利要求1所述的DNA片段，其特征在于：所述啟動子是trc啟動子；和/或所述終止子是rrnB終止子。
4.一種重組質粒，其特征在于：它包括權利要求1~3任一所述的DNA片段。
5.一種重組菌，其特征在于：它是含有如權利要求4所述重組質粒的大腸桿菌。
6.如權利要求5所述的重組菌，其特征在于：所述大腸桿菌是稀有密碼子優化型大腸桿菌Rosetta（DE3）。
7.權利要求4~6任一項所述質粒或重組菌在制備5-氨基乙酰丙酸中的用途。
8.一種制備5-氨基乙酰丙酸的方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）將如權利要求5或6所述重組菌接入含卡那霉素25 μg/mL的發酵液體培養基中，37℃震蕩培養；
（2）到OD600nm為0.5~0.7時，往培養基加入異丙基硫代半乳糖苷，使后者的終濃度為0.1mM，于28℃震蕩培養；
（3）收集并破裂重組菌菌體，提純5-氨基乙酰丙酸。
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于：步驟（2）所述OD600nm為0.6時，開始加入異丙基硫代半乳糖苷。
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