[發明專利]一種提高角蛋白酶活力的方法

在審

• 申請號: 201910246031.8
• 申請日: 2019-03-28
• 公開（公告）號: CN109797145A
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發明（設計）人: 王天文;梁辰;安亞菲;肖颯;徐紅菊
• 申請（專利權）人: 信陽師范學院
• 主分類號: C12N9/54
• 分類號: C12N9/54;A23K10/14;C05F17/00;C05G3/04;C12R1/085
• 代理公司: 南京業騰知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32321
• 代理人: 鄭婷

本發明公開了一種提高角蛋白酶活力的方法，包括以下方面：(1)在培養基中加入錳離子來培養產角蛋白酶的菌株Bacillus cereus FDB?18B以提高其在發酵液中所產角蛋白酶的活力；(2)在羽毛發酵培養基中加入錳離子，以提高該菌在羽毛發酵中羽毛的降解能力；(3)在測定角蛋白酶活力時加入錳離子，以顯著提高角蛋白酶的活力。

技術領域

本發明涉及一種利用錳離子提高角蛋白酶活力的方法，屬于微生物技術領域。

技術背景

隨著我國人民膳食結構中肉食比例的提高，家禽屠宰產生的廢棄羽毛數量也不斷增加(主要是雞毛)。據估算，每年將產生1100萬噸的規模。雖然羽毛的主要成分是角蛋白，但是其特殊結構使其非常穩定，難以被消化利用；這不但造成資源浪費，而且也給環境保護帶來了壓力。因此角蛋白的去除必須依賴化學或微生物方法。化學方法需要較高的能量消耗，而某些可以產生角蛋白酶的微生物可以加速這一進程，而且可以使整個過程更加綠色環保。角蛋白的生物酶解法是一種通過可產生角蛋白酶的微生物分解角蛋白，以消除環境危害的方法，具有極大的發展前景。角蛋白酶是可以降解羽毛角蛋白的一種特殊的蛋白酶，除了可以作用于其他可溶性蛋白底物外，它還可以作用于不可溶的蛋白質。角蛋白酶具有廣泛的發展前景，可以用于處理相關行業(農業，養畜牧業)產生的羽毛，而且可以用于洗滌、紡織及皮革加工等領域的角蛋白酶制劑。洗滌產品中加入角蛋白酶可降低洗滌劑用量并提高清洗效率。除此之外，還可以用于化妝品、工業以及醫藥方面，提高皮膚外用藥物的療效，具有重要的經濟和環保意義。

朊病毒感染已成為臨床上一個重要的問題。非一次性使用的醫療器械或設備(如各種需要深入人體內部或是可與人體組織接觸的各種傳感器探頭及手術工具)，其上面可能含有朊病毒，是導致其在患者之間傳播的一個重要途徑。由于朊病毒對傳統滅活方法的耐受性(如朊病毒，需要在1M NaOH中浸泡數小時方能使其蛋白質變性；或是在更長的高溫高壓下方能通過熱變性失活)，加上某些醫療物品本身無法接受這樣劇烈的消毒滅菌條件，使清洗變得困難。已有研究表明，能夠降解羽毛的角蛋白酶可以在溫和的條件下，通過清洗有效清除朊病毒。當然，也可以清除其他血液成分。因而，角蛋白酶可用于醫療器械清洗液的酶制劑成分。但是，長期以來，這些物品的清洗都依賴于進口的清洗液。因此，開發可以有效清除朊病毒的蛋白酶，或是改善其活力，將會為問題的解決提供重要支持。

發明內容

本發明的目的在于解決現有技術的不足，提供一種操作簡單，效果顯著的提高角蛋白酶活力的創新方法，將為開發可用于醫療清洗的洗滌液提供重要支持，緩解臨床上這些產品僅能依賴進口的局面。

技術方案

一種提高角蛋白酶活力的方法，其特征在于，通過添加錳離子以提高角蛋白酶的活力。

1.在Bacillus cereus FDB-18B菌株的培養基中添加錳離子，以提高其所產角蛋白酶的活力，具體步驟如下：

(1)取Bacillus cereus FDB-18B菌株甘油保藏菌液，劃線接種于LB固體培養基上，然后在37℃下培養24h，LB固體培養基上有菌落生成；

(2)挑取菌落接種于裝有10ml LB液體培養基中，37℃、150rpm下培養16h，得到菌液；

(3)取1ml菌液接種于50ml LB液體培養基中，往培養基中加入錳離子至濃度為0.1-2mM，然后在37℃、150rpm下培養32h，得到菌液；

(4)將步驟(3)得到的菌液進行離心取上清液，用標準方法以酪蛋白為底物，測定660nm吸光度并計算蛋白酶活力。

進一步，步驟(1)中，每升LB固體培養基的組成為：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，氯化鈉10.0g，50％的甘油水溶液8ml，瓊脂20.0g，pH7.0；102℃滅菌5min。