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[發明專利]一種表達羧肽酶G2的基因工程菌及其制備方法和應用有效

專利信息
申請號: 201910245430.2 申請日: 2019-03-28
公開(公告)號: CN111748505B 公開(公告)日: 2022-12-30
發明(設計)人: 胡又佳;謝麗萍;阮江雄;韓姝;徐磊;龔桂花;張偉;沈鴻月 申請(專利權)人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
主分類號: C12N1/21 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N9/48;C12R1/19
代理公司: 上海弼興律師事務所 31283 代理人: 薛琦;呂學辰
地址: 200040 上*** 國省代碼: 上海;31
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 表達 羧肽酶 g2 基因工程 及其 制備 方法 應用
【權利要求書】:

1.一種表達羧肽酶G2的基因工程菌,其特征在于,在大腸桿菌(Escherichia coli)中同時表達SUMO蛋白標簽和羧肽酶G2的基因工程菌,表達所述SUMO蛋白標簽的SMT3基因位于表達所述羧肽酶G2的CPG2基因的上游;

所述的CPG2基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO: 1所示;

所述的SMT3基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO: 2所示。

2.如權利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述的基因工程菌攜帶自5’端至3’端依次含有啟動子、SMT3基因、CPG2基因和終止子的表達載體。

3.如權利要求2所述的基因工程菌,其特征在于,所述的表達載體的骨架為質粒pET-28a;

和/或,所述的啟動子為T7啟動子。

4.如權利要求1~3任一項所述的基因工程菌在制備羧肽酶G2中的應用。

5.一種如權利要求1~3任一項所述的基因工程菌的制備方法,其特征在于,所述的制備方法包括下列步驟:將SMT3基因、CPG2基因整合到大腸桿菌中,所述SMT3基因位于所述CPG2基因的上游。

6.如權利要求5所述的制備方法,其特征在于,所述的制備方法包括以下步驟:

(1)構建含有SMT3基因和CPG2基因的表達載體;

(2)以大腸桿菌為宿主菌株,用步驟(1)得到的表達載體進行轉化,獲得所述基因工程菌。

7.一種羧肽酶G2的制備方法,其特征在于,包括將如權利要求1~3任一項所述的基因工程菌發酵,從發酵液中獲得羧肽酶G2。

8.一種表達載體,其特征在于,自5’端至3’端依次含有SMT3基因、CPG2基因;

所述的CPG2基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO: 1所示;

所述的SMT3基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO: 2所示。

9.如權利要求8所述的表達載體,其特征在于,所述的表達載體的骨架為質粒pET-28a。

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