[發(fā)明專利]一種對于犬瘟熱病毒及抗體的ELISA檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910244740.2
• 申請日: 2019-03-28
• 公開（公告）號: CN110108884A
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭霄峰;姜賀;翟燕镅
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;C07K14/12;C12N15/45;C12N15/70
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 單香杰

本發(fā)明公開了一種對于犬瘟熱病毒及抗體的ELISA檢測方法，本發(fā)明利用犬瘟熱病毒N蛋白在制備犬瘟熱檢測試劑盒，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本發(fā)明僅使用犬瘟熱病毒的N蛋白作為抗原建立ELISA檢測方法，N蛋白作為犬瘟熱病毒保守蛋白具有較好的抗原性，其能夠在防止病毒擴散的前提下對于血清樣品中的抗犬瘟熱病毒抗體進行量化，檢測血液來源機體對于犬瘟熱病毒的免疫狀態(tài)或是細胞所分泌犬瘟熱病毒的免疫水平，相比較于其他產(chǎn)品更為安全高效，對于犬瘟熱病毒的基礎(chǔ)研究以及臨床檢測具有積極意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動物病毒學(xué)及動物免疫技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種對于犬瘟 熱病毒及抗體的ELISA檢測方法。

背景技術(shù)

犬瘟熱病一種犬科動物的疾病，屬三類動物疫病，主要感染犬科動物，傳染 渠道主要是通過與病獸直接接觸傳染，也可通過空氣或食物傳染，不屬于人畜共 患病。

犬瘟熱是由犬瘟熱病毒(CDV)引起的一種高度接觸性傳染病，傳染性強， 死亡率可高達80％以上。犬瘟熱癥狀初期狗的體溫高達39.5～41攝氏度，食欲 不振，精神沉郁，眼鼻流出水樣分泌物，打噴嚏，有腹瀉。在以后2～14天內(nèi)再 次出現(xiàn)體溫升高，咳嗽，有膿性鼻涕、膿性眼屎這時候已經(jīng)是犬瘟中期了。同時 繼發(fā)胃腸道疾病，嘔吐、拉稀，食欲廢絕。精神高度沉郁，嗜睡。犬瘟熱發(fā)病后 期就會出現(xiàn)典型的神經(jīng)癥狀，口吐白沫，抽搐，此時比較難治。

CDV可以感染多種家養(yǎng)及野生動物，其中主要受到犬瘟熱影響的是家養(yǎng)寵 物犬以及毛皮獸貂等。CDV主要引起動物胃腸炎，呼吸道感染以及大腦、脊髓 的神經(jīng)組織感染。在幼犬中死亡率高達80％，在成年犬中也有50％的死亡率。目 前針對犬瘟熱的抗體檢測方法中，缺少一種快速而準確的定量檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)現(xiàn)有市場中針對檢測犬瘟熱抗體的方法 無法定量的不足，提供一種犬瘟熱抗體的檢測方法，作為定量檢測犬瘟熱抗體含 量的有效檢測方法。

本發(fā)明的第一個目的是提供犬瘟熱病毒N蛋白在制備犬瘟熱檢測試劑盒中 的應(yīng)用。

本發(fā)明的第二個目的是提供犬瘟熱病毒N蛋白的編碼基因在制備犬瘟熱檢 測試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第三個目的是提供一種犬瘟熱病毒N蛋白的制備方法。

本發(fā)明的第四個目的是提供一種犬瘟熱ELISA檢測試劑盒。

本發(fā)明的第五個目的是提供一種檢測犬瘟熱的酶標版。

本發(fā)明的第六個目的是提供所述的重組菌或重組載體任一在制備犬瘟熱檢 測試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第七個目的是提供所述的酶標版在制備犬瘟熱檢測試劑盒中的應(yīng) 用。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)的：

本發(fā)明要求保護犬瘟熱病毒N蛋白在制備犬瘟熱檢測試劑盒中的應(yīng)用，其 氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本發(fā)明要求保護犬瘟熱病毒N蛋白的編碼基因在制備犬瘟熱檢測試劑盒中 的應(yīng)用，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

進一步本發(fā)明保護一種犬瘟熱病毒N蛋白的制備方法，包括以下步驟：

S1.獲得核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的犬瘟熱病毒N蛋白的編碼基因， 并連入表達載體，得到重組載體；

S2.將重組載體轉(zhuǎn)化入受體菌，得到重組菌；

S3.挑取陽性的單菌落培養(yǎng)，液體培養(yǎng)基培養(yǎng)至OD₆₀₀＝0.8～1，加入IPTG 使其終濃度為0.5～1.5mmol/L，36～38℃繼續(xù)培養(yǎng)3.5～7小時，離心取沉淀；