[發明專利]一種抗原固定化基質膜及包含其的用于檢測自身免疫疾病相關抗核抗體譜的試劑盒及其用途

在審

• 申請號: 201910244501.7
• 申請日: 2019-03-28
• 公開（公告）號: CN110346576A
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發明（設計）人: 徐愛民;鐘鈴;韓灝;凱·基恩;周鵬程;左陪軍
• 申請（專利權）人: 英諾診斷有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/535
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬;呂學辰

本發明公開了一種抗原固定化基質膜及包含其的用于檢測自身免疫疾病相關抗核抗體譜的試劑盒及其用途。所述的抗原固定化基質膜包含但不僅包含以下22條彼此獨立的抗原檢測線，所述的抗原檢測線由雙鏈DNA、組蛋白、核糖體P0蛋白、PCNA、SmD1、SmD3、SmB/B’、snRNP?A、snRNP?C、snRNP68/70、SSA/Ro60、SSA/Ro52、SSB/La、Jo?1、PL?7、PL?12、PmScl、Scl?70、CENP?A、CENP?B、RA33以及PR3組成。利用包含該抗原固定化基質膜的試劑盒進行檢測，能夠同時檢測22種自身免疫抗體，用以輔助診斷8種常見彌散性結締組織病。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種抗原固定化基質膜及包含其的用于檢測自身免疫疾病相關抗核抗體譜的試劑盒及其用途。

背景技術

自身免疫性疾病(Autoimmune Diseases)是由于機體免疫系統對自身存在的抗原發生免疫反應，進而導致自身器官組織損害的一類疾病。其發病過程涉及自身抗原的暴露、機體促炎癥的微環境、先天免疫系統的激活、抗原呈遞反應激活獲得性免疫系統、T細胞的激活以及B細胞釋放出大量抗自身抗體等等病理機制。隨著免疫系統的層級紊亂和對釋放自身抗原的組織或器官的進一步攻擊和損害，最終導致器質性病變，亦即自身免疫性疾病的發生。

基于自身免疫類疾病的特殊病理機制可知，自身免疫反應的發生早于該疾病臨床表征的出現。不同的自身免疫性疾病，致病性自身抗原的種類各異，故B細胞所產生的抗自身抗原的抗體也具有疾病特異性。因此，檢測血液中的特異性自身抗體，就成為對自免類疾病進行風險預測、早期診斷的重要免疫學指標。

自身免疫性疾病可發作于人體的任何器官及組織。至今，已臨床發現超過100種不同的自免類疾病。根據世界衛生組織(World Health Organization,WHO)的權威報道，自身免疫性疾病在人群中的發病率約占總人數的3-5％。在中國，罹患此類疾病的患者數目高達6000萬人以上。自身免疫性疾病好發于女性和中老年人，其特點是起病緩慢，病程反復遷徙，反復發作，反復緩解，有的成為終生痼疾。

目前臨床實驗室使用的自身抗體免疫學檢測方法包括免疫熒光法、酶聯免疫吸附法和免疫印跡法，不同方法各有優劣。

免疫熒光法是使用具有完全自身抗原譜的人喉癌上皮細胞Hep-2或鼠肝或鼠腎的細胞冰凍切片為基質。加入血清檢測時，血清中的自免抗體可特異性結合于天然抗原上，再通過熒光染色的方法提示自身抗體的存在，屬于定性的檢測方法。根據抗體所結合的自身抗原的亞細胞定位，其染色圖譜可大致分為：均質核型、著絲點核型、核膜核型、核仁核型、斑點核型以及胞漿型六大類。

這種方法的優點是利用細胞所含的天然抗原進行自身抗體檢測，抗原譜完全，且抗原結構均為天然構像，其檢測的特異性最高。缺點是操作復雜，且定性結果判定具有主觀性，可能因為疾病進程的不同、觀察者的不同以及新老切片批次不同的差異而對染色結果釋義存在差異。同時，該方法無法通過熒光圖譜確定陽性自身抗體的具體種類，因此無法對不同種類的疾病進行特異性鑒別診斷。

酶聯免疫吸附法是將某一特定種類的自身抗原吸附于酶標板上。孵育血清后，抗原與血清中自身抗體特異性結合，再通過酶聯反應顯色的一種定量檢測手段。它具有靈敏度高、特異性強、操作方法簡便、應用范圍廣等特點。同時，可針對單類自免抗體進行特異性定量檢測，排除了診斷結果釋義中的主觀偏差。但是，單次酶聯免疫測試只能檢測單一的自免抗體，檢測通量低成本高，在自身免疫性疾病的輔助診斷應用推廣方面具有很大的局限性。

免疫印跡法是基于固相免疫測定技術的一種檢測方法。其原理是通過十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)將HEP-2細胞裂解物進行電泳分離，進而確定不同的自身抗原在電泳圖譜上的位置，再通過電轉移的方式將完全抗原譜從凝膠轉移至硝酸纖維膜或尼龍膜。孵育血清后，血清中的自身抗體與固相膜上的抗原進行特異性結合，再通過不同的信號檢測方式，如堿性磷酸酶顯色或化學發光等，對自免抗體進行半定量或定量檢測。