[發(fā)明專(zhuān)利]一種抗原固定化基質(zhì)膜及包含其的用于檢測(cè)自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒及其用途

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910244501.7
• 申請(qǐng)日: 2019-03-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110346576A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐愛(ài)民;鐘鈴;韓灝;凱·基恩;周鵬程;左陪軍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 英諾診斷有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/535
• 代理公司: 上海弼興律師事務(wù)所 31283
• 代理人: 王衛(wèi)彬;呂學(xué)辰

1.一種抗原固定化基質(zhì)膜，其特征在于，包含但不僅包含以下22條彼此獨(dú)立的抗原檢測(cè)線，所述的抗原檢測(cè)線由雙鏈DNA、組蛋白、核糖體P0蛋白、PCNA、SmD1、SmD3、SmB/B’、snRNP-A、snRNP-C、snRNP68/70、SSA/Ro60、SSA/Ro52、SSB/La、Jo-1、PL-7、PL-12、PmScl、Scl-70、CENP-A、CENP-B、RA33以及PR3組成。

2.如權(quán)利要求1所述的抗原固定化基質(zhì)膜，其特征在于，所述抗原固定化基質(zhì)膜為硝酸纖維膜或尼龍膜；所述抗原檢測(cè)線平行設(shè)置；

和/或，所述組蛋白、所述核糖體P0蛋白、所述snRNP68/70、所述PCNA、所述SmD1、所述SmD3、所述SmB/B’、所述snRNP-A、所述snRNP-C、所述SSA/Ro52、所述SSB/La、所述Jo-1、所述PL-7、所述PL-12、所述Scl-70、所述CENP-A、所述CENP-B、所述SSA/Ro60、所述PmScl-75、所述RA33及所述PR3是利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)表達(dá)獲得，所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞為HEK293細(xì)胞。

3.一種檢測(cè)自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，其特征在于，其包括如權(quán)利要求1或2所述的抗原固定化基質(zhì)膜。

4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的抗原固定化基質(zhì)膜為免疫印跡法用抗原固定化基質(zhì)膜；較佳地，所述的試劑盒還包括用于固定所述抗原固定化基質(zhì)膜的支撐載體、酶聯(lián)試劑、顯色底物、樣本稀釋液、濃縮洗滌液和反應(yīng)終止液，所述支撐載體與所述抗原固定化基質(zhì)膜組成反應(yīng)膜條。

5.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，抗原固定化基質(zhì)膜上還包被有三條質(zhì)控帶：濃度為35-50μg/ml的高濃度質(zhì)控帶、濃度為15-30μg/ml的中濃度質(zhì)控帶以及濃度為0.5-10μg/ml的低濃度質(zhì)控帶，較佳地，所述質(zhì)控帶由純化后的人源IgG劃線而成；

和/或，所述抗原固定化基質(zhì)膜上還包被有陰性對(duì)照。

6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性對(duì)照為已剝除IgG的人類(lèi)血清。

7.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述抗原固定化基質(zhì)膜上還包被有反應(yīng)起始線，所述的反應(yīng)起始線較佳地為辣根過(guò)氧化物酶。

8.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述酶聯(lián)試劑為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgG；

所述顯色底物為5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽與四唑硝基藍(lán)底物組合(BCIP/NBT)或3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺；

所述樣本稀釋液為含有10％BSA的1×TBST緩沖液；

所述濃縮洗滌液為20×TBST緩沖液；

和/或，所述反應(yīng)終止液為0.1M/L硫酸。

9.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的自身免疫疾病為彌散性結(jié)締組織病，所述的彌散性結(jié)締組織病較佳地為系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、混合型結(jié)締組織病、皮肌炎/多肌炎、系統(tǒng)性硬化癥、局限性硬皮病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和韋格納肉芽腫中的一種或多種；

和/或，所述的試劑盒還帶有反應(yīng)孵育盤(pán)，所述反應(yīng)孵育盤(pán)為具有獨(dú)立半封閉凹槽的塑料孵育盤(pán)；所述的獨(dú)立半封閉凹槽的數(shù)量較佳地為10個(gè)。

10.一種如權(quán)利要求1或2所述的抗原固定化基質(zhì)膜，或者如權(quán)利要求3～9任一項(xiàng)所述的試劑盒在檢測(cè)自身免疫疾病中的用途；所述的自身免疫疾病優(yōu)選為彌散性結(jié)締組織病，所述的彌散性結(jié)締組織病優(yōu)選為系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、混合型結(jié)締組織病、皮肌炎/多肌炎、系統(tǒng)性硬化癥、局限性硬皮病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和韋格納肉芽腫中的一種或多種。