[發(fā)明專利]一種抗原固定化基質膜及包含其的用于檢測自身免疫疾病相關抗核抗體譜的試劑盒及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910244501.7
• 申請日: 2019-03-28
• 公開（公告）號: CN110346576A
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發(fā)明（設計）人: 徐愛民;鐘鈴;韓灝;凱·基恩;周鵬程;左陪軍
• 申請（專利權）人: 英諾診斷有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/535
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛(wèi)彬;呂學辰

1.一種抗原固定化基質膜，其特征在于，包含但不僅包含以下22條彼此獨立的抗原檢測線，所述的抗原檢測線由雙鏈DNA、組蛋白、核糖體P0蛋白、PCNA、SmD1、SmD3、SmB/B’、snRNP-A、snRNP-C、snRNP68/70、SSA/Ro60、SSA/Ro52、SSB/La、Jo-1、PL-7、PL-12、PmScl、Scl-70、CENP-A、CENP-B、RA33以及PR3組成。

2.如權利要求1所述的抗原固定化基質膜，其特征在于，所述抗原固定化基質膜為硝酸纖維膜或尼龍膜；所述抗原檢測線平行設置；

和/或，所述組蛋白、所述核糖體P0蛋白、所述snRNP68/70、所述PCNA、所述SmD1、所述SmD3、所述SmB/B’、所述snRNP-A、所述snRNP-C、所述SSA/Ro52、所述SSB/La、所述Jo-1、所述PL-7、所述PL-12、所述Scl-70、所述CENP-A、所述CENP-B、所述SSA/Ro60、所述PmScl-75、所述RA33及所述PR3是利用哺乳動物細胞系統(tǒng)表達獲得，所述哺乳動物細胞為HEK293細胞。

3.一種檢測自身免疫疾病相關抗核抗體譜的試劑盒，其特征在于，其包括如權利要求1或2所述的抗原固定化基質膜。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的抗原固定化基質膜為免疫印跡法用抗原固定化基質膜；較佳地，所述的試劑盒還包括用于固定所述抗原固定化基質膜的支撐載體、酶聯(lián)試劑、顯色底物、樣本稀釋液、濃縮洗滌液和反應終止液，所述支撐載體與所述抗原固定化基質膜組成反應膜條。

5.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，抗原固定化基質膜上還包被有三條質控帶：濃度為35-50μg/ml的高濃度質控帶、濃度為15-30μg/ml的中濃度質控帶以及濃度為0.5-10μg/ml的低濃度質控帶，較佳地，所述質控帶由純化后的人源IgG劃線而成；

和/或，所述抗原固定化基質膜上還包被有陰性對照。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性對照為已剝除IgG的人類血清。

7.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述抗原固定化基質膜上還包被有反應起始線，所述的反應起始線較佳地為辣根過氧化物酶。

8.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述酶聯(lián)試劑為辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG；

所述顯色底物為5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽與四唑硝基藍底物組合(BCIP/NBT)或3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺；

所述樣本稀釋液為含有10％BSA的1×TBST緩沖液；

所述濃縮洗滌液為20×TBST緩沖液；

和/或，所述反應終止液為0.1M/L硫酸。

9.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的自身免疫疾病為彌散性結締組織病，所述的彌散性結締組織病較佳地為系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、混合型結締組織病、皮肌炎/多肌炎、系統(tǒng)性硬化癥、局限性硬皮病、風濕性關節(jié)炎和韋格納肉芽腫中的一種或多種；

和/或，所述的試劑盒還帶有反應孵育盤，所述反應孵育盤為具有獨立半封閉凹槽的塑料孵育盤；所述的獨立半封閉凹槽的數(shù)量較佳地為10個。

10.一種如權利要求1或2所述的抗原固定化基質膜，或者如權利要求3～9任一項所述的試劑盒在檢測自身免疫疾病中的用途；所述的自身免疫疾病優(yōu)選為彌散性結締組織病，所述的彌散性結締組織病優(yōu)選為系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、混合型結締組織病、皮肌炎/多肌炎、系統(tǒng)性硬化癥、局限性硬皮病、風濕性關節(jié)炎和韋格納肉芽腫中的一種或多種。