[發明專利]用于檢測C1QTNF3基因219bp缺失可變剪接體的引物、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201910242607.3
• 申請日: 2019-03-28
• 公開（公告）號: CN109825560A
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發明（設計）人: 曹果清;張雪蓮;張萬鋒;樂寶玉;張寧芳;成志敏;秦本源;高鵬飛;郭曉紅;蔡春波;李步高
• 申請（專利權）人: 山西農業大學
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

本發明提供用于檢測C1QTNF3基因219bp缺失可變剪接體的引物、試劑盒及檢測方法。所述用于檢測C1QTNF3基因219bp缺失可變剪接體的引物序列如SEQ ID NO:1?2所示。本發明利用特異性引物將C1QTNF3基因的219bp缺失可變剪接體從該基因的多種剪接形式中分離出來，對C1QTNF3基因219bp缺失可變剪接體的表達水平進行定量分析，準確、快速、方便，具有很強的實用性。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地說，涉及用于檢測C1QTNF3基因219bp缺失可變剪接體的引物、試劑盒及檢測方法。

背景技術

C1QTNF3(CORS26)又稱CTRP3或cartducin，是2003年發現的脂肪因子。C1QTNF3的生理功能是可調節軟骨細胞增殖及骨關節疾?。徽{節內分泌、糖脂代謝、線粒體生物合成、免疫、炎癥反應、細胞凋亡、血管新生、血管鈣化以及心室重塑等多種生理、病理過程；調節機體睪酮、脂肪因子的分泌。豬C1QTNF3基因在組織中廣泛表達，但其多種可變剪接體的鑒別和分離進展相對緩慢，這在一定程度上阻礙了C1QTNF3基因生理功能的研究。因此利用分子生物學手段鑒別某一剪接體組織表達模式，進而對其生物學功能的闡明具有推動作用，意義重大。

C1QTNF3屬于分泌蛋白家族，可分為4個結構域：N-末端信號肽、可變域、膠原重復序列及C-末端gC1q球型域。人和小鼠C1QTNF3的N-末端含疏水性的信號肽，無跨膜結構域，可能是非膜蛋白。C1QTNF3在人體細胞中主要以二聚體和多聚體形式存在，但與脂聯素和其他家族成員之間不能形成異源二聚體或多聚體。

可變剪接體是影響蛋白質發揮功能的重要原因之一。目前在人類中已經發現兩種C1QTNF3剪接異構體(C1QTNF3 transcript variant 1，C1QTNF3 transcript variant 2)。然而，在豬中僅發現一種C1QTNF3剪接異構體，而且檢測繁瑣、耗時長、準確率低，因此亟需開發新的檢測技術手段，為深入探究剪接體的生物學功能奠定基礎。

發明內容

本發明的目的是提供用于檢測C1QTNF3基因219bp缺失可變剪接體的引物、試劑盒及檢測方法。

發明人在對豬C1QTNF3基因克隆和功能研究的過程中發現該基因第1外顯子缺失了219bp的片段，這種缺失符合GT-AG剪接模式，據此提供一種檢測C1QTNF3基因219bp缺失可變剪接體的引物以及包含該引物的試劑盒及檢測方法，可有效解決現有的檢測方法程序繁瑣、耗時長、準確率低的問題。

為了實現本發明目的，第一方面，本發明提供用于檢測C1QTNF3基因219bp缺失可變剪接體的引物，包括引物CX2-F和CX2-R，它們的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:1-2所示。

第二方面，本發明提供含有所述引物CX2-F和CX2-R的試劑盒。

進一步地，所述試劑盒還包括用于擴增18S內參基因的引物18S-F和18S-R，它們的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:3-4所示。

第三方面，本發明提供所述引物CX2-F和CX2-R、或含有上述引物的試劑盒在檢測C1QTNF3基因219bp缺失可變剪接體中的應用。

第四方面，本發明提供一種檢測C1QTNF3基因219bp缺失可變剪接體的方法，包括以下步驟：

1)提取待測樣本總RNA，反轉錄成cDNA；

2)以步驟1)的cDNA為模板，利用引物18S-F和18S-R qPCR擴增18S內參基因，同時利用引物CX2-F和CX2-R qPCR擴增C1QTNF3基因219bp缺失可變剪接體；