[發明專利]一種特立帕肽的合成方法

有效

• 申請號: 201910240603.1
• 申請日: 2019-03-27
• 公開（公告）號: CN109879954B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 冷國慶;張琪;蘇宏健;王麗莉;田輝;楊文龍;余榮熹;景文巖;王艷;張鳳蓮;侯繼元;謝俊;楊樺;于通浩;冷青
• 申請（專利權）人: 哈爾濱吉象隆生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/635
• 分類號: C07K14/635;C07K1/14;C07K1/08;C07K1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種特立帕肽的合成方法，包括以下步驟：先將樹脂固相載體和Fmoc?Phe?OH偶聯得到Fmoc?Phe?樹脂；然后依照特立帕肽的氨基酸序列，從碳端開始使Fmoc?Phe?固相載體先偶聯17位絲氨酸，得到肽樹脂A；將肽樹脂A中17位絲氨酸的游離羥基與Fmoc?Asn(Trt)?OH進行酯縮合，并脫除Fmoc保護基團，得到肽樹脂B；然后再按照特立帕肽主鏈肽序，依次偶聯其他具有N端Fmoc保護且側鏈保護的氨基酸，最終獲得特立帕肽樹脂，經過裂解得到特立帕肽粗肽；最后將特立帕肽粗肽進行分離純化，凍干，得到特立帕肽純品。該方法制備得到的特立帕肽純品純度在99％以上，總收率最高為52.3％，最大單一雜質在0.12％以下。

技術領域

本發明涉及藥物化學技術領域，涉及一種肽的合成方法，更具體的說是涉及一種特立帕肽的合成方法。

背景技術

骨質疏松癥作為一種進行性的代謝性骨病變，可導致患者尤其是老年患者發生骨折，從而嚴重影響患者的生活質量，甚至威脅患者的生命。現有的藥物治療可降低患者發生骨折的風險，減少骨量的丟失，但是不能重建受損的骨的微觀結構。因此，盡管使用了現有的治療藥物，但仍有很多患者會發生骨折，或發生骨折的風險仍比較高。人們迫切需要有新的、能夠改善骨結構的骨質疏松癥治療藥物，其目標是進一步降低骨折風險。

特立帕肽，英文名稱為Teriparatide，其肽序為：

H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-OH，商品名Forteo，是美國禮來公司開發的一種合成的多肽激素，其為人甲狀旁腺素(PTH)的1-34氨基酸片段，該片段是含有84個氨基酸的內源性PTH的具有生物活性的N-末端區域。

PTH由甲狀旁腺分泌，是血鈣濃度的一個重要調節因子。血鈣濃度下降可刺激PTH的合成與分泌。PTH有3個作用：增加骨鈣的釋放；減少從腎臟清除的鈣量；刺激產生可增加鈣吸收的1，25-二羥基維生素D3(1，25(OH)2D3)。雖然PTH的一個主要作用是刺激破骨細胞吸收骨質，但是有研究提供了令人信服的證據：成骨細胞系的骨原細胞是PTH的一個主要作用靶位。PTH間斷用藥可增加成骨細胞的數量，增加骨的形成。

目前的常規骨質疏松藥物一般只通過作用于破骨細胞來減緩或阻斷骨質流失，而特立帕肽這種甲狀旁腺激素的衍生物有增加成骨細胞數目、增強其活性及阻止成骨細胞凋亡的作用。因其可增加成骨細胞的活性及數量，從而可以促進骨生長，用于嚴重骨質疏松的治療。

特立帕肽刺激骨形成和骨吸收，可減少絕經后婦女骨折的發生率，根據給藥方式的不同，還能提高或降低骨密度。連續輸注可導致甲狀旁腺素PTH濃度持續增高，因此比僅引起血清甲狀旁腺素PTH濃度短暫增高的每日注射法產生的骨吸收作用更強。此外，本藥不抑制二磷酸腺苷誘導途徑或者膠原誘導途徑的血小板聚集反應。

目前一種比較流行的合成特立帕肽的方法是固相逐步合成(SPPS)法，該方法具有操作簡單、設備要求低等特點。但是因為特立帕肽由34個氨基酸組成，固相逐步合成法的產品收率低，肽段容易卷曲，反應位點不易暴露，而且產品純化困難，不易得到高純度的特立帕肽。該方法價格成本高，步驟較繁瑣，總體收率不高。

因此，如何提供一種操作簡單且收率和純度較高的特立帕肽的合成方法是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種特立帕肽的合成方法，該方法操作簡單、總收率高、純度高、成本低等特點，利于工業化生產。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種特立帕肽的合成方法，包括以下步驟：