[發明專利]基于化學衍生化與HPLC-MS的不飽和脂肪酸定量方法

在審

• 申請號: 201910238742.0
• 申請日: 2019-03-27
• 公開（公告）號: CN109884212A
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發明（設計）人: 蔣宇揚;高丹;宋超;李上富
• 申請（專利權）人: 清華大學深圳研究生院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

本發明公開了一種基于化學衍生化與HPLC?MS的不飽和脂肪酸定量方法1)以直接質譜分析確定脂肪酸的標準優化錐電壓和碰撞能量電壓；2)以不飽和脂肪酸A作為內標，將內標和標準品脂肪酸進行碳碳雙鍵環氧化，并通過HPLC?ESI?MS方法進行檢測，建立標準品脂肪酸與內標的標準曲線；3)將待測脂肪酸進行碳碳雙鍵環氧化；4)將環氧化的待測脂肪酸以內標法，通過HPLC?ESI?MS方法進行檢測，檢測待測脂肪酸的含量，并在步驟1)所得的標準曲線上進行回歸，得到待測脂肪酸的含量。本發明對脂肪酸的異構體進行準確的定量檢測，并且簡化了定量的流程，提高了定量檢測的準確性。

技術領域

本發明涉及液質聯用技術領域，特別是涉及一種用于利用脂肪酸環氧化衍生物來進行定性定量檢測的液質聯用方法。

背景技術

脂肪酸是中性脂肪、磷脂和糖脂的主要成分。在有充足氧供給的情況下，脂肪酸可氧化分解為CO₂和H₂O，并釋放大量能量，因此脂肪酸是機體主要能量來源之一¹。脂肪酸在人體中通常以酯化形式存在，作為中性脂、磷脂和糖脂等脂質的組分。酯化脂肪酸在磷脂酶的作用下水解得到游離脂肪酸(free fatty acids，FFA)，游離脂肪酸為非酯化的脂肪酸，是類脂代謝物的重要組成部分。一方面，外源性的脂肪通過血漿轉運，以游離脂肪酸的形式進入脂肪細胞，再合成脂肪儲存，同時機體內的內源性脂肪主要在肝臟中合成，也通過血漿轉運而進入脂肪細胞儲存；另一方面，儲存的脂肪不斷降解，以游離脂肪酸的形式進入各組織被氧化利用，使脂肪代謝處于動態平衡。研究表明，游離脂肪酸與糖、脂代謝異常²及其他心血管病，如肥胖、高血壓、高胰島素血癥、Ⅱ型糖尿病等關系密切^3-4。

同時，由于結構的差別，脂肪酸的種類繁多，不同結構的脂肪酸在生物體的生命活動中起到的意義也不盡相同⁵。短鏈脂肪酸由于易揮發，所以在生物體中以及食物中積累的含量較少，其最大的功能是提供能量，如丁酸(C₄H₈O₂)，其還有調節免疫應答和炎癥反應，同時具有抑制腫瘤生長，促進細胞分化和凋亡的作用⁶。長鏈脂肪酸則是生物體中累積的脂肪酸的主要組成成分，碳鏈長短不同，其性質也有差異⁷，研究中發現膳食中月桂酸(C₁₂H₂₄O₂)和肉豆蔻酸(C₁₄H₂₈O₂)可以增加血清中膽固醇含量，棕櫚酸(C₁₆H₃₂O₂)則能降低血清中膽固醇的含量⁸。同時由于飽和脂肪酸以及不同飽和度的不飽和脂肪酸在生物體中承擔的生命意義也有所不同^9-10，關于多不飽和脂肪酸ω-6PUFA和ω-3PUFA的研究表明，多不飽和脂肪酸對腦、視網膜和神經組織發育有影響。此外，ω-3PUFA對腫瘤有較好的抑制作用。Spencer等¹¹的研究表明，ω-3PUFA能夠抑制腫瘤新生血管的形成，其作用機制可能與血管內皮生長因子有關。而ω-6PUFA卻會促進癌細胞的轉運，促進癌癥的增殖¹²。因此，研究ω-3PUFA與ω-6PUFA在人體組織中的比例關系，對癌癥的研究具有極其重要的意義。