[發明專利]基于化學衍生化與HPLC-MS的不飽和脂肪酸定量方法

在審

• 申請號: 201910238742.0
• 申請日: 2019-03-27
• 公開（公告）號: CN109884212A
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發明（設計）人: 蔣宇揚;高丹;宋超;李上富
• 申請（專利權）人: 清華大學深圳研究生院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種高效液相-質譜聯用的不飽和脂肪酸定量檢測方法，其包括以下步驟：

1)以直接質譜分析確定脂肪酸的標準優化錐電壓和碰撞能量電壓；

2)以不飽和脂肪酸A作為內標，將內標和標準品脂肪酸進行碳碳雙鍵環氧化，并通過HPLC-ESI-MS方法進行檢測，建立標準品脂肪酸與內標的標準曲線；

3)將待測脂肪酸進行碳碳雙鍵環氧化；

4)將環氧化的待測脂肪酸以內標法，通過HPLC-ESI-MS方法進行檢測，檢測待測脂肪酸的含量，并在步驟1)所得的標準曲線上進行回歸，得到待測脂肪酸的含量。

2.根據權利要求1所述的不飽和脂肪酸定量檢測方法，其特征在于，所述的碳碳雙鍵環氧化方法為以單過硫酸氫鉀復合鹽(Oxone)作為氧化劑，四氫噻喃-4酮1，1-二氧化物作為催化劑進行環氧化反應。

3.根據權利要求1-2任一項所述的不飽和脂肪酸定量檢測方法，步驟3)為在脂肪酸的有機溶劑中加入過硫酸氫鉀和四氫噻喃-4-酮1,1-二氧化物，同時加入EDTA二鈉鹽溶液，并將pH調節到7-8；在40-80℃下反應至完全，以有機溶劑萃取后干燥有機層，得到環氧化產物。

4.根據權利要求1-3任一項所述的不飽和脂肪酸定量檢測方法，其特征在于，步驟2)中，標準曲線通過以下方法獲得：

2-1)在不同濃度的標準品脂肪酸中分別加入內標；

2-2)將步驟2-1)所得混合物分別進行碳碳雙鍵環氧化；

2-3)以高效液相-質譜聯用檢測，保持內標濃度不變，根據不同油酸濃度下檢測其環氧化產物和內標的環氧化產物的強度比建立標準曲線。

5.根據權利要求1-4任一項所述的不飽和脂肪酸定量檢測方法，步驟2)中，標準曲線中標準品的濃度為4-6個梯度濃度。

6.根據權利要求1-5任一項所述的不飽和脂肪酸定量檢測方法，其特征在于，所述的待測脂肪酸來自血液樣本，并通過以下方法處理獲得，

a)將血漿樣品中加入甲醇和緩沖液稀釋，然后加入甲酸酸化；

b)加入乙酸乙酯震蕩并離心，取上清液并以乙酸乙酯震蕩后離心，取上清液吹干即得待測脂肪酸。

7.根據權利要求1-6任一項所述的不飽和脂肪酸定量檢測方法，其特征在于，不飽和脂肪酸A選自人體血漿中不存在或者含量極少的不飽和脂肪酸，優選為十七烯酸。

8.一種檢測生物樣本中不飽和脂肪酸精確定量檢測方法，其包括從生物樣本中提取不飽和脂肪酸的步驟，并通過權利要求1-7任一項所述的檢測方法，檢測不飽和脂肪酸含量。