[發明專利]一種蒙椴種苗的組織培養方法

有效

• 申請號: 201910236138.4
• 申請日: 2019-03-27
• 公開（公告）號: CN109863998B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 趙泉勝;鐵英;白玉娥;彭鵬;周曉煒;馮建芳
• 申請（專利權）人: 蒙樹生態建設集團有限公司;內蒙古和盛生態科技研究院有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 王睿

1.一種蒙椴種苗的組織培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）對蒙椴種子進行以下操作：

[1] 將蒙椴種子與細砂按1:3的重量比混合，揉搓至種子表面粗糙，將種子洗凈后浸泡2~4d；

[2] 將浸泡后的種子濾干，加入濃硫酸浸泡2~4min后取出洗凈，并用水浸泡過夜，該步驟進行兩次，然后對蒙椴種子進行滅菌處理；

（2）將滅菌后的蒙椴種子去除種皮，接種于誘導培養基中進行誘導培養，得到不定芽；

所述誘導培養基是以WPM培養基為基礎，并添加2,4-D、GA₃、蔗糖和瓊脂得到，所述誘導培養基中2,4-D的濃度為1.0mg/L，GA₃的濃度為1.0mg/L，蔗糖的濃度為30g/L，瓊脂的濃度為5.5g/L，且所述誘導培養基的pH值為5.8~6.0；

所述誘導培養為將滅菌后的蒙椴種子剝除種皮后接種于誘導培養基中，在溫度為25±2℃下暗培養15~25天，直至種子萌發；待幼苗高度為3~5cm時改為弱光培養，待高度為7~10cm時得到不定芽；

所述弱光培養的條件為光照強度1000~1500 lx，光照時間為14h/d；

（3）將所述不定芽接種于繼代培養基中進行繼代培養，得到繼代苗；

所述繼代培養基是以WPM培養基為基礎，并添加6-BA、IBA、GA₃、蔗糖和瓊脂得到，所述繼代培養基中6-BA的濃度為3.0mg/L，IBA的濃度為1.0mg/L，GA₃的濃度為3.0mg/L，蔗糖的濃度為30g/L，瓊脂的濃度為5.5g/L，且所述繼代培養基的pH值為5.8~6.0；

所述繼代培養為將所述不定芽接種于繼代培養基中，在溫度為25±2℃、光照強度為2500~3000Lx、光照時間為16h/d的條件下進行培養，每隔30天進行一次繼代培養，每次繼代培養更換培養基，并對不定芽進行分化，直至得到繼代苗；

（4）將所述繼代苗接種于生根培養基中進行生根培養，得到生根苗；

所述生根培養基是以WPM培養基為基礎，并添加IBA、NAA、蔗糖和瓊脂得到，所述生根培養基中IBA的濃度為0.5mg/L，NAA的濃度為0.2mg/L，蔗糖的濃度為20g/L，瓊脂的濃度為5.5g/L，且所述生根培養基的pH值為5.6~5.8。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述滅菌處理為將所述種子依次使用酒精溶液和次氯酸鈉溶液浸泡后，然后用無菌水沖洗。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述酒精溶液的體積分數為75%，所述次氯酸鈉溶液的質量濃度為2%。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（4）中，所述生根培養為將所述繼代苗接種于生根培養基中，在溫度為25±2℃、光照強度為2500~3000Lx、光照時間為16h/d的條件下，培養25~30天，得到生根苗。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（4）結束后，還包括步驟（5）：將所述生根苗洗凈后，在基質中培養15~20天得到移栽苗。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述基質中草炭、蛭石、珍珠巖的體積比為5：3：1。