[發(fā)明專利]一種熱穩(wěn)性提高的融合型脂肪酶及其制備方法和應用

有效

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• 申請日: 2019-03-27
• 公開（公告）號: CN109776686B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設計）人: 黃遵錫;姜占寶;苗華彪;韓楠玉
• 申請（專利權）人: 云南師范大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N9/20;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;A23K20/189
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 苗艷榮

本發(fā)明屬于生物工程技術領域，公開了一種熱穩(wěn)性提高的融合型脂肪酶及其制備方法和應用，融合型脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示，融合型脂肪酶由編碼梳棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶氨基酸序列中N端融合了一段由30～32個氨基酸組成的雙親短肽，所述的雙親短肽的氨基酸序列為SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2。兩種融合型脂肪酶具有較理想耐熱特性，因此特別適合工業(yè)化大規(guī)模生產。

技術領域

本發(fā)明屬于生物工程技術領域，涉及兩種融合型脂肪酶，具體為一種熱穩(wěn)性提高的融合型脂肪酶及其制備方法和應用。

背景技術

脂肪酶是一類重要的水解酶，能夠催化甘油三酯上酯鍵的水解。在特定的條件下還可以催化酸解、醇解、轉酯、氨解、間接氧化還原等許多反應。以脂肪酶整體來看，它們具有底物多樣性；具體到某一種酶的時候，又表現出很強的底物特異性。所有這些特性使得脂肪酶成為了重要的生物催化劑，被廣泛應用于食品、化工、洗滌劑、醫(yī)藥、化妝品等領域。

但是目前我國脂肪酶產品種類比較單一，能夠產生重大工業(yè)價值的酶種有限，市售的酶制劑純度也有待提高，對于有重要生產使用價值的酶種應該大力研究和開發(fā)。其中熱穩(wěn)定、高活力的脂肪酶更是具有無可比擬的開發(fā)和應用優(yōu)勢。疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyces lanuginosus)是一種分布廣泛、生長上限溫度較高的真菌。它能夠產生熱穩(wěn)定的、具有重要工業(yè)價值的脂肪酶。但是野生菌產生脂肪酶需要培養(yǎng)溫度高(80℃)，造成在實際生產中菌體培養(yǎng)條件苛刻，產品成本增加的問題，同時限制了脂肪酶在工業(yè)生產的應用。

梳棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶工業(yè)生產損失量比較大，生產成本也會大幅度提高。若能將梳棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶的熱穩(wěn)定性提高，則其生產成本也會隨之下降。因此，本發(fā)明通過對梳棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶基因上的改造使其成為耐熱性比較高的脂肪酶。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供提供一種融合型脂肪酶及其應用，旨在解決梳棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶的耐熱性較差和在工業(yè)生產上不理想的問題。

本發(fā)明具體通過以下技術方案實現：

一種熱穩(wěn)性提高的融合型脂肪酶，所述的融合型脂肪酶由梳棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶在N端融合雙親短肽構成，所述的雙親短肽由30～32個氨基酸組成，所述的雙親短肽為雙親短肽1或雙親短肽2，其氨基酸序列分別為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。

所述的梳棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

具體的，所述的融合型脂肪酶由梳棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶氨基酸序列SEQ IDNO.3中在N端融合了一段由30～32個氨基酸組成的雙親短肽1或雙親短肽2而獲得。

本發(fā)明所述的融合型脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示。所述的融合型脂肪酶的編碼基因如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7所示。

所述的融合型脂肪酶的酶促反應最適pH值為9.0；最適溫度為50℃；在pH7-pH12、37℃條件下，pH耐受1小時，殘活還在50％，在pH9-pH12、37℃條件下，pH耐受1小時，殘活還在80％以上，脂肪酶融合雙親短肽1在80℃耐受45min殘活在50％以上；脂肪酶融合雙親短肽2在80℃耐受35min殘活在50％以上。

在本發(fā)明的另一方面，所述的氨基酸序列SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5經修飾、缺失或添加一或幾個氨基酸獲得氨基酸序列，且保持只有90％的同源性的序列也在本發(fā)明的保護范圍內。

在本發(fā)明的另一方面，與所述的編碼基因SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7編碼相同蛋白質，但因遺傳密碼的簡并性而與SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列或其互補序列不同的核苷酸序列也在本發(fā)明的保護范圍內。