[發明專利]一種測定銀杏葉中活性成分含量的方法

有效

• 申請號: 201910231409.7
• 申請日: 2019-03-26
• 公開（公告）號: CN109765321B
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 付玉杰;王立濤;楊清;孟冬;牛麗麗;樊小紅;簡悅
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明屬于化學分析及檢測技術領域，尤其涉及一種測定銀杏葉中活性成分含量的方法。本發明運用超高效液相色譜?串聯四級桿質譜聯用儀，采用電噴霧陰離子串聯質譜多反應檢測(MRM)模式，快速在線優化包括碎裂電壓以及碰撞能在內的質譜參數，使之形成高強度的靶向離子對，通過此系列特征性的靶向離子對，從而達到對銀杏葉藥材中的銀杏內酯、黃酮醇苷及雙黃酮3類活性成分的快速定性和定量分析；本發明的檢測方法操作簡單，具有高靈敏度和精密度、重現性好、穩定性高、回收率好，可實現同時測定銀杏葉中所含的銀杏內酯、黃酮醇苷及雙黃酮3類活性成分，彌補現有藥材質量控制技術不夠完善和科學的不足，能準確、全面地控制銀杏葉藥材的質量。

技術領域

本發明涉及化學分析及檢測技術領域，尤其涉及一種測定銀杏葉中活性成分含量的方法。

背景技術

銀杏葉為銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L.的干燥葉，具有活血化瘀、通絡止痛、斂肺平喘等功效，常用于治療心腦血管疾病及老年癡呆癥。銀杏葉化學成分復雜，迄今已發現170多種化合物，主要為黃酮類化合物、萜內酯類化合物、醇類化合物、生物堿類化合物、聚異戊二烯類化合物、多糖等具有藥理作用的活性成分。

據2015版《中國藥典》規定，銀杏葉藥材的質量控制指標僅有黃酮醇苷和萜內酯兩類活性成分，其中對于銀杏葉黃酮類化合物質量標準的研究，也僅是先采用20％鹽酸水解，然后測定槲皮素、山奈素和異鼠李素3個成分的含量，最后折算成總黃酮醇苷含量的方法，然而，此方法只能籠統得到銀杏葉中總黃酮的含量，不能對銀杏葉中的每一個黃酮類成分進行檢測，不能準確的反應銀杏葉中每一個黃酮類成分的相對含量，不利于對銀杏葉及其制劑進行更為精準的質量控制。

由于銀杏葉萜內酯類物質的化學結構不存在明顯的發色團，其在銀杏葉中的含量極低，且不易分離純化，容易被銀杏葉中所含的其他具有強紫外吸收的物質所干擾，往往需要進行樣品前處理(柱層析、固相吸附或超臨界萃取)以去除可能的干擾，再配合蒸發光檢測器進行高效液相色譜法定量分析，其中具有強紫外吸收的物質主要是黃酮醇類物質，而黃酮醇類物質恰恰是銀杏葉中另一類需要定量檢測的活性成分，從而造成難以有效測定銀杏萜內酯類活性成分含量的問題。

此外，銀杏葉藥材中除了黃酮醇苷類和萜內酯類活性成分外，還含有非常豐富的雙黃酮類化合物，主要包括7-去甲基銀杏雙黃酮、銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮及金松雙黃酮，由于該類成分不在《中國藥典》規定的質量控制指標之內，因而往往被大多數人或企業所忽視。大量研究表明，銀杏葉藥材中的異銀杏雙黃酮具有體內外抑制大鼠血栓形成的作用。銀杏雙黃酮具有抗卵巢腺癌細胞活性，特別是對I型皰疹病毒(HSV-1)具有很強的抑制活性，同時對II型皰疹病毒(HSV-2)以及人類巨細胞也具有抑制活性，抗炎活性效果優于潑尼松龍，此外還具有抗氧化活性等。因此，為了提高和完善銀杏葉藥材的質量標準，對除黃酮醇苷和萜內酯類成分之外的雙黃酮類活性成分進行研究，顯得尤為重要。

對于銀杏葉及其制劑中活性成分含量的測定方法，現有技術多采用不同的檢測方法分別檢測銀杏萜類內酯、黃酮醇苷及雙黃酮3類活性成分，該方法的缺點是需要采用不同的儀器、不同的樣品處理條件分別檢測，從而導致操作步驟繁雜，工藝簡便性不足。因此，實現同時測定銀杏葉中銀杏內酯、黃酮醇苷及雙黃酮3類活性成分含量的測定，彌補現有藥材質量控制技術不夠完善和科學的不足，準確、全面地控制銀杏葉藥材的質量，具有重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種測定銀杏葉中活性成分含量的方法，該方法能夠實現同時測定銀杏葉中銀杏內酯、黃酮醇苷及雙黃酮3類活性成分含量的測定，彌補現有藥材質量控制技術不夠完善和科學的不足，準確、全面地控制銀杏葉藥材的質量。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種測定銀杏葉中活性成分含量的方法，包括以下步驟：

提供銀杏葉供試品溶液；提供銀杏葉標準品溶液；