[發(fā)明專利]一種去除豬血清對傳代細胞生長毒性的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910227595.7
• 申請日: 2019-03-25
• 公開（公告）號: CN109971698A
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發(fā)明（設計）人: 胡井雷;劉景利;徐姍姍;張廣柱;馬蘭;楊丹;楊帆;魏興
• 申請（專利權）人: 哈爾濱維科生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

一種去除豬血清對傳代細胞生長毒性的方法，屬于細胞培養(yǎng)技術領域。為了解決豬流行性腹瀉抗血清中豬血清細胞毒性的技術問題，本發(fā)明提供了一種去除豬血清對傳代細胞生長毒性的方法，包括如下步驟：1)將豬血在無菌條件下進行離心處理，離心后收取豬血清；2)將步驟1)中獲得的豬血清用無菌容器密封后滅能；3)滅能后豬血清用已滅菌的活性炭進行吸附，吸附后收集豬血清；4)吸附后的豬血清經(jīng)過濾滅菌后加入到長滿單層的傳代細胞中，繼續(xù)培養(yǎng)細胞。本發(fā)明可用于細胞培養(yǎng)相關實驗研究。

技術領域

本發(fā)明屬于細胞培養(yǎng)技術領域，具體涉及一種去除豬血清對傳代細胞生長毒性的方法。

背景技術

經(jīng)多次抗原免疫后的豬，抽取血清用于實驗室實驗,常出現(xiàn)細胞毒性，導致細胞難以存活的問題，實驗無法繼續(xù)。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決豬流行性腹瀉抗血清中豬血清細胞毒性的技術問題，本發(fā)明提供了一種去除豬血清對傳代細胞生長毒性的方法，包括如下步驟：

1)將豬血在無菌條件下進行離心處理，離心后收取豬血清；

2)將步驟1)中獲得的豬血清用無菌容器密封后滅能；

3)滅能后豬血清用已滅菌的活性炭進行吸附，吸附后收集豬血清；

4)吸附后的豬血清經(jīng)過濾滅菌后加入到長滿單層的傳代細胞中，繼續(xù)培養(yǎng)細胞。

進一步地限定，步驟1)所述豬血為豬流行性腹瀉抗血清的豬血。

進一步地限定，步驟1)所述離心處理，條件為5000g/分鐘，離心時間為10分鐘。

進一步地限定，步驟2)所述滅能，條件為56℃滅能30分鐘。

進一步地限定，步驟3)所述吸附，是指將滅能后豬血清用已滅菌活性炭按1:1體積比混合后于4℃吸附24小時，24小時后按1:1體積比重新更換活性炭再次吸附24小時。

進一步地限定，步驟3)所述活性炭為果殼活性炭。

進一步地限定，步驟3)所述活性炭在0.02N 12/KL水溶液中吸附的碘的量大于600，比表面積大于850m²/g。

進一步地限定，步驟4)所述過濾是指將吸附后的豬血清經(jīng)無菌0.22μm濾器進行過濾。

進一步地限定，步驟4)所述經(jīng)過濾滅菌后的豬血清在培養(yǎng)傳代細胞時的用量，以96孔培養(yǎng)板計，每孔加入100μL。

進一步地限定，上述方法中所述細胞包括ST細胞、Vero細胞和Marc-145細胞。

有益效果

本發(fā)明處理后的豬血清在細胞培養(yǎng)過程中，相比于未經(jīng)過本發(fā)明處理的豬血清，經(jīng)過168小時的培養(yǎng)后未對細胞生長過程產(chǎn)生任何毒性影響。

附圖說明

圖1 Vero細胞培養(yǎng)第0天的觀察結(jié)果；

圖2 Vero細胞培養(yǎng)第24小時的觀察結(jié)果，其中a為加入經(jīng)處理后的豬血清；b加入未經(jīng)處理后的豬血清；

圖3 Vero細胞培養(yǎng)第48小時的觀察結(jié)果，其中a為加入經(jīng)處理后的豬血清；b加入未經(jīng)處理后的豬血清；

圖4 Vero細胞培養(yǎng)第72小時的觀察結(jié)果，其中a為加入經(jīng)處理后的豬血清；b加入未經(jīng)處理后的豬血清；

圖5 Vero細胞培養(yǎng)第96小時的觀察結(jié)果，其中a為加入經(jīng)處理后的豬血清；b加入未經(jīng)處理后的豬血清；

圖6 Vero細胞培養(yǎng)第120小時的觀察結(jié)果，其中a為加入經(jīng)處理后的豬血清；b加入未經(jīng)處理后的豬血清；