[發明專利]鑒定小麥產量相關性狀的分子標記與方法

有效

• 申請號: 201910227211.1
• 申請日: 2019-03-25
• 公開（公告）號: CN109797242B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發明（設計）人: 毛新國;景蕊蓮;張宏娟
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/6858
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 魏少偉

1.鑒定或輔助鑒定小麥產量相關性狀的方法，所述產量相關性狀為穗長和每穗小穗數，所述方法包括：檢測待測小麥H和J位點的核苷酸，根據H和J位點的核苷酸確定待測小麥性狀：

H位點為T的小麥穗長長于或候選長于H位點為G的小麥穗長；J位點為C的小麥每穗小穗數多于或候選多于J位點為T的小麥每穗小穗數；

所述H位點為序列表序列1自5′末端的第31位，其為T或G；

所述J位點為序列表序列2自5′末端的第21位，其為T或C。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述檢測待測小麥H和J位點的核苷酸包括1）和2）：

1）利用名稱為PH的引物對對待測小麥的基因組DNA進行PCR擴增，檢測PCR擴增產物對應于序列表中序列1的第31位的核苷酸，確定所述H位點的核苷酸；所述PH能擴增得到含有所述H位點的DNA片段；所述PH由名稱分別為pe1和pe2的單鏈DNA組成，所述pe1的序列為序列表中序列3，所述pe2的序列為序列表中序列4；

2）利用名稱為PJ的引物對對待測小麥的基因組DNA進行PCR擴增，檢測PCR擴增產物對應于序列表中序列2的第21位的核苷酸，確定所述J位點的核苷酸；所述PJ能擴增得到含有所述J位點的DNA片段；所述PJ由名稱分別為pe3和pe4的單鏈DNA組成，所述pe3的序列為序列表中序列5，所述pe4的序列為序列表中序列6。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：檢測PCR擴增產物對應于序列表中序列1的第31位的核苷酸通過包括如下a1）或a2）的方法完成：

a1）利用HaeⅢ對所述PH的PCR擴增產物進行酶切，得到酶切產物，檢測所述酶切產物的大小，根據所述酶切產物的大小確定PCR擴增產物對應于序列表中序列1的第31位的核苷酸：若所述酶切產物為308 bp的DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列1的第31位的核苷酸為T，即所述待測小麥在H位點的核苷酸為T；若所述酶切產物為276 bp、32 bp的兩個DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列1的第31位的核苷酸為G，即所述待測小麥在H位點的核苷酸為G；若所述酶切產物為308 bp、276 bp、32 bp的三個DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列1的第31位的核苷酸為T和G，即所述待測小麥在H位點的核苷酸為T和G；

a2）對所述PH的PCR擴增產物進行測序，若所述PCR擴增產物含有序列表中序列1所示的DNA片段、且不含有序列9所示的DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列1的第31位的核苷酸為G，即所述待測小麥在H位點的核苷酸為G；若所述PCR擴增產物含有序列表中序列9所示的DNA片段、且不含有序列1所示的DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列1的第31位的核苷酸為T，即所述待測小麥在H位點的核苷酸為T；若所述PCR擴增產物含有序列表中序列9和序列1所示的兩條DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列1的第31位的核苷酸為T和G，即所述待測小麥在H位點的核苷酸為T和G；

檢測所述PJ的PCR擴增產物對應于序列表中序列2的第21位的核苷酸通過包括如下b1）或b2）的方法完成：

b1）利用SalⅠ對所述PJ的PCR擴增產物進行酶切，得到酶切產物，檢測所述酶切產物的大小，根據所述酶切產物的大小確定PCR擴增產物對應于序列表中序列2的第21位的核苷酸：若所述酶切產物為216 bp的DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列2的第21位的核苷酸為T，即所述待測小麥在J位點的核苷酸為T；若所述酶切產物為200 bp、16 bp的兩條DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列2的第21位的核苷酸為C，即所述待測小麥在J位點的核苷酸為C；若所述酶切產物為216 bp、200 bp、16 bp的三條DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列2的第21位的核苷酸為T和C，即所述待測小麥在J位點的核苷酸為T和C；

b2）對所述PH的PCR擴增產物進行測序，若所述PCR擴增產物含有序列表中序列10所示的DNA片段、且不含有序列11所示的DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列2的第21位的核苷酸為T，即所述待測小麥在J位點的核苷酸為T；若所述PCR擴增產物含有序列表中序列11所示的DNA片段、且不含有序列10所示的DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列2的第21位的核苷酸為C，即所述待測小麥在J位點的核苷酸為C；若所述PCR擴增產物含有序列表中序列11和序列10所示的兩條DNA片段，所述PCR擴增產物對應于序列表中序列2的第21位的核苷酸為T和C，即所述待測小麥在J位點的核苷酸為T和C。