[發明專利]一種金槍魚骨膠原多肽的制備方法

在審

• 申請號: 201910225417.0
• 申請日: 2019-03-25
• 公開（公告）號: CN109762864A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 武益正;雷芬芬;侯杰;胡傳榮;徐慶菊;何東平;王新新;張四紅
• 申請（專利權）人: 泰安市海之潤食品有限公司;武漢輕工大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/78;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 常州市權航專利代理有限公司 32280
• 代理人: 陳萍

本發明公開了一種金槍魚骨膠原多肽的制備方法，包括如下步驟：將金槍魚骨蛋白與蒸餾水混勻，并進行加熱加壓處理，得到金槍魚骨蛋白漿液；調節金槍魚骨蛋白漿液pH，并加入木瓜蛋白酶進行酶解，得到酶解液；將酶解液滅酶得到滅酶酶解液；將滅酶酶解液靜置冷卻，離心取上清液后再進行超濾處理，得膠原多肽粗液；將膠原多肽粗液依次加入到陰離子交換樹脂層析柱中洗脫，葡聚糖凝膠柱層析中洗脫，采用高效液相色譜進行純化處理，即得金槍魚骨膠原多肽。該金槍魚骨膠原多肽的制備方法，工藝安全、制備便捷。

技術領域

本發明涉及多肽技術領域，具體涉及一種金槍魚骨膠原多肽的制備方法。

背景技術

金槍魚類，又叫鰭魚、吞拿魚，是硬骨魚綱妒形目科魚類中具有胸甲幾個屬魚類的總稱。金槍魚體呈紡錘形，向后漸細尖而尾基細長，尾鰭叉狀或新月形，尾柄兩側有明顯的棱脊，背、臀鰭后方各有一行小鰭，肩部有由擴大之鱗片組成的胸甲。金槍魚作為一種深海魚類，素來以營養價值高、純天然、無污染而享譽國際市場并有“海洋黃金”、“海底雞”的美稱，金槍魚的DHA、EPA含量遠高于秋刀魚、鱔魚、沙丁魚、蛙魚、竹莢魚、鯉魚等六種魚類，每100g魚肉的脂肪酸含量含量高達20.12％；金槍魚肉熱量和脂肪含量均低于其他肉類，而蛋白質含量高居首位，鐵含量僅次于牛肉，維生素E的含量是僅次于它的肌肉的12倍多，營養價值顯著；金槍魚在加工過程中產生大量碎肉，常被加工成魚粉飼料，利用價值較低。

發明內容

針對上述技術中存在的不足之處，本發明提供了一種工藝安全、制備便捷的金槍魚骨膠原多肽的制備方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種金槍魚骨膠原多肽的制備方法，包括如下步驟：步驟一、金槍魚骨蛋白的制備；步驟二、將所述金槍魚骨蛋白與蒸餾水混勻，并進行加熱加壓處理，得到金槍魚骨蛋白漿液；步驟三、調節所述金槍魚骨蛋白漿液pH，并加入木瓜蛋白酶進行酶解，待酶解反應結束，得到酶解液；步驟四、將所述酶解液在沸水浴中滅酶8～15分鐘，得到滅酶酶解液；步驟五、將所述滅酶酶解液靜置冷卻，離心取上清液后再進行超濾處理，即得膠原多肽粗液；步驟六、將膠原多肽粗液加入到陰離子交換樹脂層析柱中，依次用雙蒸水、NaCl溶液洗脫，得到離子交換層析物；步驟七、將離子交換層析物溶于雙蒸水中配成離子交換層析物溶液，將其離心取上清液后再加入到葡聚糖凝膠柱層析中，再用雙蒸水進行洗脫，得到凝膠層析物；步驟八、將所述凝膠層析物溶于雙蒸水中配成凝膠層析物溶液，再采用高效液相色譜對其進行純化處理，即得金槍魚骨膠原多肽。

優選的，所述步驟一中金槍魚骨蛋白的制備過程如下：將金槍魚下腳料去頭、尾、鰭，取其魚肉骨架切段，并將其與中性蛋白酶溶液按料液比1:5～10混合，在溫度為45～65℃，pH為7.5的條件下進行酶解脫肉2～3小時，得到金槍魚骨架，所述金槍魚骨架上的碎肉與所述金槍魚骨架的質量比小于1:1000,再將所述金槍魚骨架放入0.1mol/L NaOH溶液中攪拌20～30小時以除去雜蛋白，再用清水將其洗至中性，再置于100g/L、pH為7.2的乙二胺四乙酸二鈉中，并在溫度為3～5℃下攪拌脫鈣處理4～6天，待金槍魚骨架呈透明狀時將其洗凈，再用1mol/L的鹽酸處理16～20小時，即得到柔軟有韌性的金槍魚骨蛋白。

優選的，所述步驟二中：第一階段，將金槍魚骨蛋白與蒸餾水按料液比1：6～10混勻，并加熱至75～80℃，在壓力0.02～0.04Mpa下保溫處理5～10分鐘；第二階段，以10～15℃/min的速度繼續加熱至85～90℃，在壓力0.07～0.08Mpa下保溫處理10～15分鐘；第三階段，以5～10℃/min的速度繼續加熱至100℃，以100℃的高溫蒸汽繼續保溫處理15～20分鐘，得到金槍魚骨蛋白漿液。

優選的，所述步驟三中調節所述金槍魚骨蛋白漿液的pH至7～9，并加入木瓜蛋白酶進行酶解，酶解反應溫度為55～65℃，酶解反應時間為4～5小時，待酶解反應結束，得到酶解液。

優選的，所述木瓜蛋白酶的加酶量為金槍魚骨蛋白漿液用量的1～2ug/g。