[發明專利]一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201910222766.7
• 申請日: 2019-03-22
• 公開（公告）號: CN110041424A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 楊潔;張兆肖;高楊;豆智華;王紅娟
• 申請（專利權）人: 新疆大學
• 主分類號: C07K14/76
• 分類號: C07K14/76;C07K1/34;A61K38/38;A61K45/06;A61P35/00
• 代理公司: 西安亞信智佳知識產權代理事務所(普通合伙) 61241
• 代理人: 段國剛

本發明提供一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白及其制備方法和應用，通過分離乳清蛋白采用超濾的方法獲得，以新疆雙峰駝乳清蛋白為研究對象，通過組分CM?1，含有188種已知蛋白質，含有糖基化依賴性細胞粘附分子1、α?乳白蛋白、肽聚糖識別蛋白1、維生素D結合蛋白、乳過氧化物酶、IgG?Fc片段結合蛋白、14?3?3蛋白質、Igγ?3C、乳鐵蛋白、肌動蛋白、胺氧化酶、核連蛋白、泛素?60s核糖體蛋白L4、RAS致癌基因家族成員等多種與腫瘤發生發展密切相關的蛋白質。實驗表明，CM?1對腫瘤細胞有明顯抑制增殖作用，與化療藥物聯合給藥，抑制腫瘤細胞增殖的效果明顯優于化療藥物單獨給藥，為腫瘤治療提供一種多藥聯合方案，具有廣泛的開發價值。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體地說，本發明涉及一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白及其制備方法和應用技術領域。

背景技術

駱駝是干旱、半干旱地區的主要畜種。分為單峰駱駝和雙峰駱駝兩種，單峰駝主要集中在東非、北非、印度次大陸地區和整個阿拉伯半島，雙峰駝主要分布在中國的北部和西北部地區以及整個蒙古國的沙漠或半沙漠地區，可產絨毛、泌乳、役用、肉用。

駱駝乳因其獨特的物理性質及化學性質在人類營養和疾病治療中發揮著重要的作用。駱駝乳中總蛋白含量為2.15％-4.90％，其中乳清蛋白占總蛋白的20％-25％。駱駝乳蛋白質屬營養學上的優質蛋白質，其中含有α-乳清蛋白、免疫球蛋白、乳鐵蛋白、血清白蛋白等保護性蛋白和多種生物活性因子，具有很高的營養價值。

目前，駱駝乳的功效研究多集中在輔助降血糖、調節機體免疫功能、抗菌、抗炎、抑制腫瘤細胞增殖、輔助治療艾滋病、冠心病等方面。國內研究以雙峰駝乳為主，國外尤其是沙特阿拉伯、阿聯酋、伊朗、埃及等東亞和北非等地區，對單峰駝研究較多。

發明內容

本發明提供一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白及其制備方法和應用，通過本發明從雙峰駝乳中獲得的抗腫瘤活性蛋白含有糖基化依賴性細胞粘附分子1、α-乳白蛋白、乳清酸性蛋白、肽聚糖識別蛋白1、維生素D結合蛋白、乳過氧化物酶、IgG-Fc片段結合蛋白、14-3-3蛋白質、Igγ-3C區域、乳凝集素、Igλ-C亞型19樣蛋白、乳鐵蛋白、肌動蛋白、胺氧化酶、核連蛋白、泛素-60s核糖體蛋白L4、骨橋蛋白、RAS致癌基因家族成員Rab-18、Rab-11B、Rab-1A等蛋白質，具有明顯的抗多種因素所致食管癌的作用，通過體外細胞模型研究，證明抗腫瘤活性蛋白對人肝癌細胞有抑制作用；并且抗腫瘤活性蛋白與化療藥物聯用有顯著的協同抗人食管癌腫瘤作用，增加腫瘤對化療藥物的敏感性，達到相同抑瘤效果的情況下可以通過減少化療藥物的用量減輕化療的毒副作用。本發明駝乳乳清活性蛋白具有開發高效、低毒的新型抗腫瘤藥物的前景，為臨床上腫瘤的治療提供了一種有效的手段以及藥物組合方案。

本發明提供的一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1的制備方法，通過包括如下步驟的方法制得：

(1)駝乳樣品過濾除雜，脫脂，收集脫脂乳，調節pH至4.6，于30-80℃水浴加熱10-45min或放置過夜后，離心去除沉淀，收集上清液，調節pH至初始值，分離乳清蛋白，其中超濾法經截留分子量10KDa-100KDa濾膜過濾，鹽析法采用硫酸銨飽和度20％-70％進行分級沉淀，經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，得到分子量大小在10-100KDa范圍的抗腫瘤活性蛋白組分CM-1，凍干備用；

(2)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測蛋白組分CM-1蛋白質多態性，將步驟(1)獲得的凍干組分用12-15％分離膠與5％濃縮膠進行聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，考馬斯亮藍R-250染色，通過與已知分子量的蛋白質標準品比對，測定其分子量，保證每批樣本蛋白質多態性一致。

本發明提供的通過如上制備方法獲得一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1。

本發明中，所述的駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1通過分離乳清蛋白采用超濾的方法獲得，以新疆雙峰駝乳清蛋白為研究對象，通過蛋白提取獲得抗腫瘤活性蛋白CM-1。