[發明專利]一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201910222766.7
• 申請日: 2019-03-22
• 公開（公告）號: CN110041424A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 楊潔;張兆肖;高楊;豆智華;王紅娟
• 申請（專利權）人: 新疆大學
• 主分類號: C07K14/76
• 分類號: C07K14/76;C07K1/34;A61K38/38;A61K45/06;A61P35/00
• 代理公司: 西安亞信智佳知識產權代理事務所(普通合伙) 61241
• 代理人: 段國剛

1.一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1，其特征在于，所述的抗腫瘤活性蛋白CM-1具體制備方法如下：

（1）駝乳樣品過濾除雜，脫脂，收集脫脂乳，調節pH至4.6，于30-80℃水浴加熱10-45min或放置過夜后，離心去除沉淀，收集上清液，調節pH至初始值，分離乳清蛋白，其中超濾法經截留分子量10KDa-100KDa濾膜過濾，鹽析法采用硫酸銨飽和度20%-70%進行分級沉淀，經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，得到分子量大小在10KDa-100KDa范圍的抗腫瘤活性蛋白組分CM-1，凍干備用；

（2）聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測蛋白組分CM-1蛋白質多態性將步驟（1）獲得的凍干組分用12-15%分離膠與5%濃縮膠進行聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，考馬斯亮藍R-250染色，通過與已知分子量的蛋白質標準品比對，測定其分子量，保證每批樣本蛋白質多態性一致。

2.如權利要求1所述的一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1，其特征在于，分離乳清蛋白采用鹽析的方法獲得的抗腫瘤活性蛋白CM-1，硫酸銨飽和度在20%-70%范圍的活性蛋白，其分子量范圍為10KDa -100KDa。

3.如權利要求1所述的一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1，其特征在于，抗腫瘤活性蛋白CM-1共計含有共鑒定出218種蛋白質，其中30種為未知蛋白質，明確的有188種，含有糖基化依賴性細胞粘附分子1（GlyCAM-1）、α-乳白蛋白（α-La）、乳清酸性蛋白（WAP）、肽聚糖識別蛋白1（PGRP-S）、維生素D結合蛋白、乳過氧化物酶、IgG-Fc片段結合蛋白樣蛋白、14-3-3蛋白質、Ig γ-3C、乳凝集素（Mfge8）、Igλ-C亞型19樣蛋白、乳鐵蛋白（Lf）、肌動蛋白（Actin）、胺氧化酶（SSAO）、核連蛋白（Nucleobindin）、泛素- 60s核糖體蛋白L4（Ubiquitin-60S RPL4）、骨橋蛋白（OPN）、 RAS致癌基因家族成員（Rab-18、Rab-11B、Rab-1A），均與生命過程、細胞組成以及分子功能方面密切相關。

4.如權利要求1所述的一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1，其特征在于，抗腫瘤活性蛋白CM-1相對含量大于1%的蛋白質有7種，分別是糖基化依賴性細胞粘附分子1（GlyCAM-1）、α-乳白蛋白（α-La）、乳清酸性蛋白（WAP）、肽聚糖識別蛋白1（PGRP-S）、Igγ-3C、乳凝集素（Mfge8）、Igλ鏈C亞型19樣蛋白。

5.如權利要求1所述的一種駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1，其特征在于，CM-1中含有如乳鐵蛋白（Lf）、肌動蛋白（Actin）、胺氧化酶（SSAO）、核連蛋白（Nucleobindin）、泛素-60s核糖體蛋白L4（Ubiquitin-60S RP L4）、骨橋蛋白（OPN）、 RAS致癌基因家族成員（Rab-18、Rab-11B、Rab-1A等）、糖基化依賴性細胞粘附分子1（GlyCAM-1）、維生素D結合蛋白、乳過氧化物酶、IgG-Fc片段結合蛋白樣蛋白、14-3-3蛋白質多種與腫瘤發生、發展密切相關的蛋白質。

6.如權利要求1所述駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1在抑制腫瘤細胞增殖中的應用。

7.如權利要求6所述駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1在抑制腫瘤細胞增殖中的應用，其特征在于，CM-1對人肝癌細胞HepG2細胞和人肝癌細胞BEL-7404細胞的增殖抑制作用呈現劑量和時間依賴性。

8.如權利要求1所述駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1在與抗癌藥物聯合給藥抑制腫瘤中的應用。

9.如權利要求8所述駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1在與抗癌藥物聯合給藥抑制腫瘤中的應用，其特征在于，CM-1與抗癌藥物聯合給藥在抑制人食管癌腫瘤中的應用。

10.如權利要求8所述駝乳乳清抗腫瘤活性蛋白CM-1在與抗癌藥物聯合給藥抑制腫瘤中的應用，其特征在于，抗癌藥物為5-氟尿嘧啶（5-FU）、順鉑（DDP）、紫杉醇（Taxol）、甲氨蝶呤（MTX）、復方替加氟（UFT）、阿糖胞苷（CAR）、絲裂霉素（MMC）、博來霉素（BLM）。