[發明專利]一種快速檢測白細胞毒素的方法

在審

• 申請號: 201910219615.6
• 申請日: 2019-03-21
• 公開（公告）號: CN109884210A
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發明（設計）人: 高冬梅
• 申請（專利權）人: 楊凌職業技術學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/36
• 代理公司: 成都弘毅天承知識產權代理有限公司 51230
• 代理人: 劉東

1.一種快速檢測白細胞毒素的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：對照樣品的準備：制備白細胞毒素溶液，對白細胞毒素溶液進行分離純化，得到高純度白細胞毒素對照樣品；

步驟2：質譜條件：Waters Xevo G2q TOF系統，采用ESI離子源負離子模式，分辨模式，用甲酸鈉矯正質量軸，用亮氨酸腦啡肽，作為標準物質進行實時矯正，氬氣作為碰撞氣體，碰撞梯度1.9，毛細管電壓2.5kV，脫溶劑溫度350-450℃，脫溶劑氣流量500-700L/Hr，離子源溫度100-140℃；

步驟3：色譜條件：采用ACQUITY-UPLC-BEH C18，2.1×100mm，1.7μm的色譜柱，柱溫：30-50℃，以0.1％甲酸水溶液為流動相A，含0.1％甲酸的乙腈溶液為流動相B，進行梯度洗脫，梯度洗脫的方式為：0-2min，25％流動相A；2-6min，25-15％流動相A；6-8min，15-10％流動相A；8-8.5min，10-25％流動相A；8.5-10min，25％流動相A；流速0.1-0.3mL/min；

步驟4：用乙腈將食品樣品溶解，過濾后注入進樣瓶，然后對食品樣品和對照樣品均進行UPLC-q TOF MS檢測。

2.根據權利要求1所述的一種快速檢測白細胞毒素的方法，其特征在于，所述步驟1中通過硅膠柱層析的方法分離純化白細胞毒素。

3.根據權利要求1所述的一種快速檢測白細胞毒素的方法，其特征在于，所述步驟1中通過高效液相色譜的方法分離純化白細胞毒素。

4.根據權利要求1所述的一種快速檢測白細胞毒素的方法，其特征在于，所述步驟1中對照樣品設置為白細胞毒素二醇，先制備白細胞毒素二醇溶液然后通過制備薄層色譜的方法分離純化白細胞毒素二醇，得到高純度白細胞毒素二醇對照樣品。

5.根據權利要求1所述的一種快速檢測白細胞毒素的方法，其特征在于，所述步驟3中梯度洗脫的方式為：0-2min，60％流動相A；2-6min，60-20％流動相A；6-8min，20-10％流動相A；8-10min，10-10％流動相A；10-10.2min，10-60％流動相A。