[發明專利]一種脂肪酶在拆分外消旋2-溴代異戊酸乙酯中的應用

有效

• 申請號: 201910217266.4
• 申請日: 2019-03-21
• 公開（公告）號: CN110066835B
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 鄭建永;吳鵬;汪釗;章銀軍;張夢婕
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12P7/62
• 分類號: C12P7/62;C12P41/00
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種脂肪酶在拆分外消旋2-溴代異戊酸乙酯中的應用，其特征在于所述脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述脂肪酶的編碼基因的核苷酸序列如SEQID NO.2所示。

3.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述應用為：以含脂肪酶編碼基因的工程菌經發酵培養獲得的濕菌體凍干后的脂肪酶粗酶粉為生物催化劑，以外消旋2-溴代異戊酸乙酯為底物，以pH7.0緩沖液為反應介質，在20-45℃、800-1000rpm條件下進行拆分反應，反應完全后，將反應液分離純化，獲得(R)-2-溴代異戊酸乙酯。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述催化劑用量以緩沖液體積計為15-30g/L，所述底物終濃度以緩沖液體積計為5-10g/L。

5.如權利要求3所述的應用，其特征在于反應時間為3-7h。

6.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述反應條件為35℃、1000rpm反應5h。

7.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述緩沖液為pH 7.0，0.2mM的Na₂HPO₄/NaH₂PO₄緩沖溶液。

8.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述催化劑按如下方法制備：將含脂肪酶編碼基因的工程菌接種在LB培養基中，37℃培養OD₆₀₀至0.4-0.6，加IPTG至終濃度0.02mM，30℃培養10-12h，菌液8000rpm，4℃離心10min，收集菌體，再用PBS緩沖液洗滌菌體2次，8000rpm，4℃離心10min，收集菌體，凍干得到脂肪酶粗酶粉。

9.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述反應液分離純化的方法為：反應結束后，反應液用4mM HCl酸化至pH 2.0，然后用等體積乙酸乙酯萃取，分液漏斗分離出有機相，再經純水洗滌兩次，飽和NaCl洗滌兩次，干燥，旋蒸，得到最終產物(R)-2-溴代異戊酸乙酯。