[發明專利]一種細胞保存液及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201910214657.0
• 申請日: 2019-03-20
• 公開（公告）號: CN109892320A
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發明（設計）人: 倪萬茂;遲妍妍;倪萬根;倪聲雷;張鴻;陳樂芝;林鵬程;張鴻君
• 申請（專利權）人: 浙江省人民醫院;浙江博真生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;G01N15/14;G01N33/53
• 代理公司: 北京鼎佳達知識產權代理事務所(普通合伙) 11348
• 代理人: 王偉鋒;劉鐵生

本發明涉及一種細胞保存液，含有以下組分：Na₂HPO₄、葡萄糖、檸檬酸、腺嘌呤、NaCl及水。本發明還提供了上述細胞保護液的制備方法和應用。本發明所提供的細胞保存液，可以長期保存骨髓、外周血、組織等，并保證免疫分型、淋巴細胞亞群檢測等多種白細胞相關檢測結果的穩定和正確，特別適用于流式細胞檢測。并且使用保存液保存的細胞依舊保持活性，可繼續進行細胞培養和死活染料標記。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體而言，涉及一種細胞保存液及其制備方法和應用。

背景技術

隨著科學技術的發展及各醫學領域對細胞的深入研究，流式細胞術作為一項常規的檢測技術應用在各個領域，在科學研究及臨床診斷方面處于越來越重要的地位。包括本申請人之前申請的申請號為20161002721.4和201610768294.1的中國發明專利申請在內的許多現有技術著重對流式細胞術本身的步驟和參數進行了研究。然而，目前對于流式細胞術樣本的保存，卻沒有一種公認的簡單快捷的保存方法或產品。

為了保證流式細胞術檢測結果的準確性，細胞樣本應盡可能保證新鮮，即使于2-8℃條件下保存，也應盡快使用，以免樣本失活導致結果偏差。

在本申請人之前申請的申請號為201610768294.1的中國發明專利申請公開了一種細胞保存液，專用于流式細胞術樣本的保存，可長時間保持樣本的穩定性，對于外周血樣本，可穩定白細胞分群及表面抗原的表達。上述專利申請所衍生的產品對細胞具有固定作用，經過保存液保存后的細胞樣本，無活性，無法繼續進行培養或死活細胞鑒別。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的是提供一種細胞保存液及其制備方法和應用。

為了達成上述的目的，本發明提供一種細胞保存液，含有以下組分：Na₂HPO₄、葡萄糖、檸檬酸、腺嘌呤、NaCl及水。

作為優選，其中所述水為純水。

作為優選，其中所述細胞保存液含有以下終濃度的組分：

Na₂HPO₄0.1-10g/L；

葡萄糖0.1-50g/L；

檸檬酸0.1-10g/L；

腺嘌呤0.1-10g/L；

NaCl 0.01-500mmol/L；

上述各組分的溶劑均為水。

所述細胞保存液沒有腐蝕性，也沒有氧化性，可以裝于多種材質的容器，如玻璃容器或塑料容器。

本發明提供了上述保存液的制備方法，包括如下步驟：將Na₂HPO₄、葡萄糖、檸檬酸、腺嘌呤、NaCl與混合均勻，即得。

作為優選，其中所述制備方法還包括混合后進行過濾和/或分裝的步驟。通?？梢圆环盅b，直接裝于大試劑瓶中儲存；對于硬連接采血方式采血樣本的保存，優選分裝成管裝的保存液，這樣可以直接向管內加入采集的血液或含細胞的樣本而進行保存。分裝可以分裝在非真空管中，也可以分裝在真空管中。鑒于通常血液樣本的采集體積為1～2ml，因此分裝的體積對應為100～300μl/管，優選為250μl/管。

本發明進一步提供了上述細胞保存液在用于流式細胞儀檢測中的應用。

作為優選，其中所述應用包括以下步驟：

1)提供含有細胞的樣本液；

2)將上述細胞保存液與所述樣本液混合，其中所述細胞保存液與所述樣本液的體積比為1:5～1:10；