[發(fā)明專利]一種細(xì)胞保存液及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910214657.0
• 申請日: 2019-03-20
• 公開（公告）號: CN109892320A
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 倪萬茂;遲妍妍;倪萬根;倪聲雷;張鴻;陳樂芝;林鵬程;張鴻君
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省人民醫(yī)院;浙江博真生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;G01N15/14;G01N33/53
• 代理公司: 北京鼎佳達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11348
• 代理人: 王偉鋒;劉鐵生

1.一種細(xì)胞保存液，其特征在于，含有以下組分：Na₂HPO₄、葡萄糖、檸檬酸、腺嘌呤、NaCl及水。

2.如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞保存液，其特征在于，所述水為純水。

3.如權(quán)利要求2所述的細(xì)胞保存液，其特征在于，所述細(xì)胞保存液含有以下終濃度的組分：

Na₂HPO₄ 0.1-10g/L；

葡萄糖 0.1-50g/L；

檸檬酸 0.1-10g/L；

腺嘌呤 0.1-10g/L；

NaCl 0.01-500mmol/L；

上述各組分的溶劑均為水。

4.一種權(quán)利要求3所述的細(xì)胞保存液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將配方量的Na₂HPO₄、葡萄糖、檸檬酸、腺嘌呤、NaCl與水混合均勻，即得。

5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括混合后進行過濾和/或分裝的步驟。

6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述分裝的體積為100～300μl/管。

7.一種權(quán)利要求3所述的細(xì)胞保存液在流式細(xì)胞儀檢測中的應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括以下步驟：

1)提供含有細(xì)胞的樣本液；

2)將上述細(xì)胞保存液與所述樣本液混合，其中所述細(xì)胞保存液與所述樣本液的體積比為1:5～1:10；

3)將步驟2)獲得的混合物保存；

4)將步驟3)獲得的混合物取出50-100μl與熒光標(biāo)記的流式單克隆抗體20μl混合加入流式管，混勻后避光孵育15分鐘；

5)向步驟4)孵育的流式管中加入溶血素2ml，混勻后室溫孵育10分鐘，200-300g，離心5分鐘，傾倒棄去上清并以200μlPBS重懸樣本；

6)流式細(xì)胞儀檢測步驟5)重懸的流式管，并計算結(jié)果；

7)一周后取出進行重復(fù)測試。

9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟1)中所述樣本液為血液、骨髓或細(xì)胞懸浮液；步驟4)中所述流式單克隆抗體包括各5μl的CD45-FITC、CD13-PE、CD33-PerCP-cy5.5和CD7-APC。

10.一種含有權(quán)利要求3所述的細(xì)胞保存液的保存劑。

11.如權(quán)利要求10所述的保存劑，其特征在于，所述保存劑還包含樣本液，所述細(xì)胞保存液與所述樣本液的體積比為1:5～1:10。

12.如權(quán)利要求10所述的保存劑，其特征在于，所述樣本液為血液、骨髓或細(xì)胞懸浮液。

13.一種權(quán)利要求10-12任一項所述的保存劑在用于流式細(xì)胞儀檢測或在制備用于流式細(xì)胞儀檢測的試劑盒中的應(yīng)用。

14.如權(quán)利要求13所述的應(yīng)用，其特征在于，所述流式細(xì)胞儀檢測為白細(xì)胞表面抗原及胞內(nèi)抗原的檢測。