[發明專利]一種離體枝條接種對梨火疫病抗病性快速鑒定的方法

在審

• 申請號: 201910210814.0
• 申請日: 2019-03-20
• 公開（公告）號: CN110042143A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 羅明;李洪濤;袁英哲;韓劍;蔣萍;張祥林;唐章虎
• 申請（專利權）人: 新疆農業大學
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12Q1/6851;C12Q1/06;A01G7/06
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本發明涉及植物保護技術領域，具體公開了一種離體枝條接種對梨火疫病抗病性快速鑒定的方法，其方法包括如下步驟：(1)梨火疫病菌接種液的制備；(2)離體枝條制備；(3)接種；(4)品種抗病性評價。本發明提供的對梨火疫病抗病性的鑒定和評價方法，將發病癥狀和分子生物學技術定量病原相結合，不僅快速簡便、規范實用，結果準確可靠，適合于對大批量材料進行抗并行的快速鑒定和篩選。

技術領域

本發明涉及植物保護技術領域，具體的說，本發明涉及一種離體枝條接種對梨火疫病抗病性快速鑒定的方法。

背景技術

梨火疫病是薔薇科仁果類果樹上的一種毀滅性病害，是我國一類進境植物檢疫危險性有害生物，危害40余屬的220多種植物，其中最感病的寄主是梨、蘋果、山楂等。梨火疫病菌（Erwinia amylovora）侵染花、葉及新梢、枝干及果實，病害流行嚴重時從花器、嫩梢很快擴展到枝條、主干，直至根部，導致果樹幾周內死亡，果園被毀，經濟損失慘重。梨火疫病現已在世界上60多個國家都有發生，目前國內還沒有梨火疫病的發生，但相鄰的日本、韓國、哈薩克斯坦等國家已經有梨火疫病的分布，隨著世界貿易的日益增長，梨火疫病的人為和自然傳播已對中國的果品生產和進出境貿易構成了潛在威脅。“梨火疫病”作為世界上最早發現的植物細菌病害，國外開展了大量研究。對“梨火疫病”防治技術包括加強檢疫、修剪和鏟除發病植株、藥劑防治、抗病品種、生物防治及利用基因工程技術提高果樹抗病性等措施。該病害寄主范圍廣、傳播途徑多、傳染性強，至今無特效藥劑和單一的防控措施，仍然未得到有效的控制。世界各地蘋果和梨的商業化生產集中種植，品種單一，缺乏抗病性品種也是病害難以控制的重要原因之一，至今依然是梨、蘋果產區主要關注的問題。

國外大量的研究表明，篩選出抗病的砧木、接穗，培育出優良的抗病品種在生產中栽培推廣是對梨火疫病最經濟、有效的防控措施。美國研究表明，在東方梨中有品種對梨火疫病具有抗病性，并已經培育出抗梨火疫病的新品種雪蘭多梨；德國篩選出2個抗病的梨屬變種。梨、蘋果在中國大面積分布，明確我國種植的梨、蘋果等薔薇科果樹對梨火疫病的抗病性水平，掌握種質資源抗病性信息，對于抗梨火疫病品種選育及果樹生產的可持續發展具有重要意義。因此，建立一套快速簡便、規范準確、實用性強的抗病性鑒定技術是抗病育種的關鍵。

目前測定寄主植物對梨火疫病菌抗病性的方法各異，主要采用果園病圃、果園自然感病和對果園苗木、盆栽幼苗、組培無菌苗、離體枝條、花器和幼果進行人工接種病原菌等方法。果園病圃、果園自然感病鑒定周期長、占地多、鑒定材料數量有限；病圃和果園的自然病原分布不均，還受到氣候和傳播媒介等各種環境因素的影響，難以獲得準確、穩定的測定結果。尤其是該病害為重大檢疫性病害，無法在非疫區無隔離的果園開展寄主抗病性鑒定試驗。采用人工接種測定寄主抗病性的方法快速簡便、鑒定材料數量不受限制，且在隔離的條件下，環境條件可控，適應大量篩選抗源材料的需要。現有的對果園苗木、盆栽幼苗、組培無菌苗、離體枝條、花器和幼果進行人工接種病原菌的方法，各具有不同的缺陷，評價寄主抗病水平的指標也不盡相同。大多方法都是采用統計發病枝條數占接種總枝條數的百分比（發病率%）、發病枝條病斑長度占接種枝條長度的比例對寄主抗/感病性進行分級，缺乏對病原菌在不同寄主內的增殖數量來定量反應寄主的抗性差異。梨幼果接種法是梨火疫病抗病性測定最經典的方法，目前仍在廣泛使用。通過針刺在果肉切面上接種病原菌，依據接種后目測在梨幼果半果果肉表面菌膿的產生時間和產生量表示梨果實的抗病力。該法難以對發病狀況進行量化統計，不能準確對其抗病性進行評級。至今現有的各種方法對不同寄主對梨火疫病菌的抗病性測定沒有統一、明確的評價方法。

本發明以不同梨、蘋果品種（種質）當年生幼嫩的離體枝條扦插水培，接種強致病力的病原菌株，通過比較病原菌接種后不同梨、蘋果品種的枝條發病率、病情指數，結合實時熒光PCR定量檢測病原菌在寄主內的數量，制定抗病性評價指標，綜合、準確評估供試寄主材料的抗病性水平。

發明內容