[發明專利]B7-H3抗原結合結構域的分離的結合蛋白、核酸、載體、CAR-T細胞及其應用

有效

• 申請號: 201910210679.X
• 申請日: 2019-03-20
• 公開（公告）號: CN109912718B
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 陳模江;王剛;劉金超
• 申請（專利權）人: 北京善科生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N5/10;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 曹桓

本發明涉及CAR?T細胞領域，具體而言，涉及B7?H3抗原結合結構域的分離的結合蛋白、核酸、載體、CAR?T細胞及其應用。本發明針對B7?H3抗原得到的scFV片段，設計構建了用CD28或者4?1BB為共刺激分子的第二代B7?H3?CAR，并且在B7?H3陽性的非小細胞肺癌中驗證了其殺傷癌細胞的能力，結果表明當T細胞與癌細胞比例為1:5時，B7?H3?CAR?T仍能夠非常高效的殺傷B7?H3陽性的非小細胞肺癌細胞，并且釋放出大量的I型干擾素，如IFNγ和TNFα。

技術領域

本發明涉及CAR-T細胞領域，具體而言，涉及B7-H3抗原結合結構域的分離的結合蛋白、核酸、載體、CAR-T細胞及其應用。

背景技術

肺癌是全球癌癥死亡率第一位的腫瘤，每年可增加大約130萬新發病例，大約80-85％的新診斷的肺癌為非小細胞肺癌，如腺癌、鱗癌和大細胞癌等。中國在2017年有約80萬新發肺癌病例，70萬死亡肺癌病例，發病率和死亡率均占世界肺癌的40％左右，遠遠高于其它國家。在中國，肺癌也是發病率和死亡率雙率第一的癌癥，隨著近年來空氣污染問題的不斷加重，預計未來肺癌患者的數量將進一步增加，嚴重影響著國人的健康和壽命。

雖然早期肺癌可通過手術的方式切除腫瘤，部分患者可實現治愈，但在絕大大多數的病例當中，患者就診時已經是晚期癌癥，屬于不可切除的病變或者已經出現轉移，屬于無法治愈的疾病狀態。對于局部進展期的非小細胞肺癌患者可以接受同步放化療，聯合或不聯合手術治療，這樣可以獲得平均8個月的無疾病進展生存，但是5年總生存率仍小于15％。就診時已經診斷為晚期肺癌的患者可接受新型的細胞毒治療藥物，如培美曲塞等，中位生存時間約為17個月。

CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T Cells的英文縮寫)是一種基于基因改造的自體T細胞的免疫療法。該療法在提取患者的T細胞后，通過基因改造，將一種特定的蛋白----嵌合抗原受體(即CAR)表達在T細胞的表面，借此識別癌細胞表面的特異抗原，并通過這些T細胞的抗原清除能力殺死癌細胞。CAR-T治療在目前開展的多項臨床試驗中取得了巨大的成功，尤其是靶向CD19和BCMA的CAR-T。雖然CAR-T治療淋巴瘤、白血病等血液系統腫瘤已取得非常好的臨床治療效果，但CAR-T在實體瘤中的研究進展相對緩慢，其中一個重要的原因是沒有合適的靶點，因為通常在實體瘤中高表達的抗原也會在一些正常組織表達。

CAR-T作為最新型的革命性的免疫治療方法在白血病中已經實現了驚人的治療效果，如何應用于實體瘤還需要進一步地研發。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明針對B7-H3抗原得到的scFV片段，設計構建了用CD28或者4-1BB為共刺激分子的第二代B7-H3-CAR，并且在B7-H3陽性的非小細胞肺癌中驗證了其殺傷癌細胞的能力，結果表明當T細胞與癌細胞比例為1:5時，B7-H3-CAR-T仍能夠非常高效的殺傷B7-H3陽性的非小細胞肺癌細胞，并且釋放出大量的I型干擾素，如IFNγ和TNFα。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一方面，本發明提供包含B7-H3抗原結合結構域的分離的結合蛋白，其輕鏈可變區和/或重鏈可變區的氨基酸序列依次如SEQ ID NO.1-2所示以及與SEQ ID NO.1-2所示的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列。

須知，與SEQ ID NO.1-2所示的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列是由本領域技術人員能夠推知通過某一個或某幾個氨基酸序列變換而仍具有較好的與B7-H3抗原結合的效果。如根據實際情況，至少95％的序列同一性可以為95％、96％、97％、98％、99％等等，氨基酸發生變化的個數可以為1個、2個、3個、4個、5個、6個等等。

進一步地，所述結合蛋白為sc FV片段。