[發明專利]一種豬胰脂肪酶固定化的方法

在審

• 申請號: 201910206823.2
• 申請日: 2019-03-19
• 公開（公告）號: CN109735530A
• 公開（公告）日: 2019-05-10
• 發明（設計）人: 詹世平;王景昌;商雪航;侯維敏
• 申請（專利權）人: 大連大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14
• 代理公司: 大連八方知識產權代理有限公司 21226
• 代理人: 衛茂才

本發明涉及生物醫用高分子材料制備的技術領域，具體是一種豬胰脂肪酶（IPPL）固定化的方法。本發明方法采用氨基化二氧化硅顆粒為載體，豬胰脂肪酶（IPPL）為固定化對象，豬胰脂肪酶與載體之間是依靠共價結合的方式相互連接的。本發明方法制備的固定化酶的活性可達6.67 U/g，固定化酶催化活性高，且制備方法簡單高效環保，是一種具有廣泛應用前景的綠色催化劑的制備方法。

技術領域

本發明涉及生物醫用高分子材料制備的技術領域，具體是一種豬胰脂肪酶（IPPL）固定化的方法。

技術背景

酶催化合成生物可降解脂肪族聚酯是一種新型聚合方法，可以在溫和條件下高效合成，有著傳統方法難以比擬的優勢，但該方法所合成的產物仍存在生物相容性低、機械性能差、分子量低等不足。但是通過酶的固定化、功能化改性、調節支鏈等方法可以提高酶的催化效率和活性、降低反應能耗和材料中殘留的有毒物質、提高原料轉化率和產物分子量、增強產物親水性及開發材料新用途。近年來固載化脂肪酶的技術得到很大的發展，固定化技術使酶穩定性大幅度提高，單位酶的生產力提高，以及重復利用性明顯提高。超臨界二氧化碳（ScCO₂）作為反應介質已經被廣泛應用于高分子聚合反應工程，且ScCO₂作為反應介質具有有機溶劑無法比擬的優勢。固定化脂肪酶可在ScCO₂中用于生物醫用高分子材料合成的綠色催化劑，催化活性高。

發明內容

本發明的目的是提供一種豬胰脂肪酶（IPPL）固定化的方法。

為實現上述發明目的，本發明的技術方案如下：

一種豬胰脂肪酶固定化的方法，所述方法采用氨基化二氧化硅顆粒為載體，豬胰脂肪酶（IPPL）為固定化對象，豬胰脂肪酶與載體之間是依靠共價結合的方式相互連接的。

上述一種豬胰脂肪酶固定化的方法，所述方法包括以下步驟：

（1）將氨基化二氧化硅顆粒加入到0.1mol/L、pH=7~9的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)中，超聲，在氮氣保護下，加入戊二醛，戊二醛在上述PBS溶液中的體積濃度為0.5~2.5%，攪拌，離心棄去上清液，用0.01 mol/L PBS溶液清洗顆粒，即得載體溶液；

（2）在載體溶液中，加入4 mg/mL的豬胰脂肪酶（IPPL）溶液，恒溫反應；其中IPPL溶液與0.1mol/L PBS溶液的體積比為10:1~4；

（3）反應結束后，離心棄去上清液，加入甘氨酸封閉，離心洗滌，用0.01 mol/L PBS（含0.001 mol/L的EDTA和0.008 mol/L的半胱氨酸）清洗顆粒并恒溫干燥，得氨基化二氧化硅固定化酶顆粒。

可選的，步驟（1）中PBS溶液的pH為7.5，戊二醛在上述PBS溶液中的體積濃度為2.0%；步驟（2）中IPPL溶液與0.1mol/L PBS溶液的體積比為10:2，反應溫度40℃，反應時間8h。

與現有技術相比，本發明的優點在于：本發明方法制備的固定化酶在超臨界二氧化碳中活性可達到6.67 U/g，是一種優良的固定化酶催化劑。本發明酶與載體是共價鍵連接，結構穩定，使用的原料和溶劑均為綠色試劑，制備方法簡單高效，可用于生物醫用高分子材料的綠色催化劑，是一種具有廣泛應用前景的固定化酶的制備方法。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明做進一步說明。