[發明專利]一種超臨界二氧化碳中固定化脂肪酶活性的測定方法在審
| 申請號： | 201910206822.8 | 申請日： | 2019-03-19 |
| 公開（公告）號： | CN109750083A | 公開（公告）日： | 2019-05-14 |
| 發明（設計）人： | 詹世平;王景昌;商雪航;侯維敏 | 申請（專利權）人： | 大連大學 |
| 主分類號： | C12Q1/44 | 分類號： | C12Q1/44 |
| 代理公司： | 大連八方知識產權代理有限公司 21226 | 代理人： | 衛茂才 |
| 地址： | 116622 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 超臨界二氧化碳 固定化酶 固定化脂肪酶 催化活性 生物醫用高分子材料 固定化豬胰脂肪酶 應用 氨基化二氧化硅 醫用高分子材料 固定化酶活性 聚乙烯 酸堿滴定法 橄欖油溶液 大型儀器 合成生物 綠色試劑 酶催化劑 底物 溶劑 催化劑 制備 測量 測試 | ||
1.一種超臨界二氧化碳中固定化脂肪酶活性的測定方法，其特征在于，所述方法采用聚乙烯醇和橄欖油溶液為底物，氨基化二氧化硅固定化豬胰脂肪酶為酶催化劑，應用酸堿滴定法測定了固定化酶在超臨界二氧化碳中的催化活性。
2.根據權利要求1所述的一種超臨界二氧化碳中固定化脂肪酶活性的測定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
（1）底物溶液的配置：聚乙烯醇與橄欖油混合，調節底物溶液pH值為6~10，經高速勻質機處理，備用；
（2）待測酶液的制備：氨基化二氧化硅固定化豬胰脂肪酶樣品溶解至PBS溶液中，備用；
（3）活性測定過程：將反應釜、底物溶液、酶液分別預熱至溫度50℃，然后將底物溶液和酶液加入到反應釜中，反應系統用二氧化碳吹掃，關閉出氣閥，加熱升溫至反應溫度40~110℃，打壓至反應壓力8~15 MPa，磁力攪拌下保壓反應，反應結束后，于釜中加入15 mL 95%乙醇溶液終止反應，反應液用氫氧化鈉標準溶液滴定，至顏色變為粉紅，根據消耗氫氧化鈉標準溶液的體積計算出固定化脂肪酶活性。
3.根據權利要求2所述的一種超臨界二氧化碳中固定化脂肪酶活性的測定方法，其特征在于，所述步驟（1）中聚乙烯醇的濃度為4%，聚乙烯醇與橄欖油的體積比為3:1，底物溶液pH值為9。
4.根據權利要求2所述的一種超臨界二氧化碳中固定化脂肪酶活性的測定方法，其特征在于，所述步驟（2）中控制酶液濃度，使樣品與對照品消耗堿量之差在1~2 mL范圍內。
5.根據權利要求4所述的一種超臨界二氧化碳中固定化脂肪酶活性的測定方法，其特征在于，所述步驟（2）中氨基化二氧化硅固定化豬胰脂肪酶樣品0.1~0.2 g溶解到20 mLPBS溶液中。
6.根據權利要求5所述的一種超臨界二氧化碳中固定化脂肪酶活性的測定方法，其特征在于，所述步驟（2）中氨基化二氧化硅固定化豬胰脂肪酶樣品0.2 g溶解到20 mL PBS溶液中。
7.根據權利要求2所述的一種超臨界二氧化碳中固定化脂肪酶活性的測定方法，其特征在于，所述步驟（3）中橄欖油與氨基化二氧化硅固定化豬胰脂肪酶的質量比為100:1。
8.根據權利要求2所述的一種超臨界二氧化碳中固定化脂肪酶活性的測定方法，其特征在于，所述步驟（3）中加反應溫度為49~110℃，反應壓力8~15 MPa 。
9.根據權利要求8所述的一種超臨界二氧化碳中固定化脂肪酶活性的測定方法，其特征在于，所述步驟（3）中加反應溫度為90℃，反應壓力12 MPa。
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