[發明專利]一種甜瓜育種材料目標性狀高效純合方法

在審

• 申請號: 201910205728.0
• 申請日: 2019-03-19
• 公開（公告）號: CN109722489A
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發明（設計）人: 汪承剛;侯金鋒;朱世東;袁凌云;陳國戶;蘇亞;李仁杰;王安源
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;A01H1/04;A01H1/02
• 代理公司: 合肥廣源知識產權代理事務所(普通合伙) 34129
• 代理人: 徐國法

1.一種甜瓜育種材料目標性狀高效純合方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）種質收集及DNA提?。?/p>

收集甜瓜種質材料，將收集的甜瓜種質材料進行播種，發芽成苗后，取樣進行DNA提取，備用；

（2）PCR擴增：

根據前人研究結果選取RAPD、ISSR、SSR標記引物，將具有多態性的標記引物對步驟（1）中提取的DNA進行PCR擴增，得擴增產物備用；

（3）電泳：

將步驟（2）中所得的擴增產物進行凝膠電泳；

（4）銀染：

將步驟（3）中電泳結束后的凝膠進行銀染，顯色，備用；

（5）數據分析：

a. 根據步驟（4）中顯色的PCR產物電泳條帶位置，進行多態性分析，得到分子數據備用；

b. 應用操作a中所得的分子數據，由structure軟件進行群體結構分析，得到群體結構數據備用；

c. 田間鑒定記錄甜瓜種質資源的表型，得到表型數據備用；

d. 應用操作a中所得的分子數據、操作b中所得的群體結構數據、操作c中所得的表型數據進行關聯，從而鑒定與各個性狀緊密連鎖的分子標記，并進一步分析挖掘特異等位變異；

（6）雜合后代F1的獲?。?/p>

根據育種目標，結合甜瓜種植資源表型數據，選擇帶有目標性狀的材料，進行雜交或自交，獲得雜合后代F1；

（7）純合后代的選擇：

a. 將步驟（6）中所得的雜合后代F1進行自交獲得F2代種子，F2代種子進行溫室育苗，2周后，采樣提取DNA，以F2代幼苗的DNA為模板，以步驟（5）操作d中獲得的目標性狀關聯的分子標記引物，進行PCR擴增及凝膠電泳分析；

b. 根據操作a中所得的凝膠電泳條帶位置，選擇攜帶多個增效等位變異的后代進行田間栽培，并結合實際觀察，進行單株選擇或對表型一致的家系進行混合選擇，得F2單株或株系；

c. 將操作b中初選的各F2代單株或株系分別自交，得F3代種子，并按照步驟（7）操作a中的方法將F3代種子進行溫室育苗、提取DNA、應用與目標性狀關聯的分子標記引物進行PCR擴增及凝膠電泳分析；

d. 根據操作a中所得的凝膠電泳條帶位置，選擇攜帶多個增效等位變異的后代進行田間栽培，并結合實際觀察，進行單株選擇或對表型一致的家系進行混合選擇，得F3單株或株系；

e. 將操作d中選擇的不同F3代單株或株系分別自交，得F4代，從中選出相對純合且表現型符合育種目標的育種材料即可。

2.根據權利要求1所述一種甜瓜育種材料目標性狀高效純合方法，其特征在于，所述步驟（1）中取樣取的是甜瓜植株相同器官的相同部位。

3.根據權利要求1所述一種甜瓜育種材料目標性狀高效純合方法，其特征在于，所述步驟（3）中RAPD與ISSR分子標記PCR產物在1×TAE緩沖液中用2%瓊脂糖凝膠上電泳，SSR標記PCR產物在12%非變性聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳。

4.根據權利要求1所述一種甜瓜育種材料目標性狀高效純合方法，其特征在于，所述步驟（5）操作c中表型數據包括始花節位、葉型、坐果節位、果實形狀、果皮顏色、果肉顏色、果實硬度、果實中心折光糖度、果實發育期、全生育期、單果重量、畝產。