[發(fā)明專利]核苷酸序列tWPRE及其基因表達(dá)載體和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910201832.2
• 申請(qǐng)日: 2019-03-18
• 公開（公告）號(hào): CN109929864A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊蕊菊;楊興林;劉曉芬;夏清梅;楊佳麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 和元生物技術(shù)（上海）股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/66
• 分類號(hào): C12N15/66;C12N15/864;C12N7/01;C07K14/02
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 陸惠中;王永偉

1.一種含有WPRE-polyA元件的核苷酸序列tWPRE，其特征在于，所述tWPRE的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一種基因表達(dá)載體，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的核苷酸序列tWPRE。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因表達(dá)載體，其特征在于，所述載體包括骨架質(zhì)粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基因表達(dá)載體，其特征在于，所述骨架質(zhì)粒為pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLA-WPRE-hGH polyA。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因表達(dá)載體，其特征在于，所述基因表達(dá)載體為pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

6.一種構(gòu)建權(quán)利要求2-5中任意一項(xiàng)所述的基因表達(dá)載體的方法，其特性在于，包括以下步驟：

S1：合成核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列tWPRE；

S2：將骨架質(zhì)粒雙酶切后回收純化；

S3：將S2中回收純化的產(chǎn)物與S1中的核苷酸序列tWPRE連接；

S4：將連接后的質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)化涂板；

S5：挑取單菌落并進(jìn)行測(cè)序鑒定。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或者權(quán)利要求2-5中任意一項(xiàng)所述的基因表達(dá)載體在細(xì)胞轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求2-5中任意一項(xiàng)所述的基因表達(dá)載體進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)接種細(xì)胞；

(2)待細(xì)胞匯合度至50％-80％時(shí)，將權(quán)利要求2-5中任意一項(xiàng)所述的基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

9.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或權(quán)利要求2-5中任意一項(xiàng)所述的基因表達(dá)載體。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核苷酸序列tWPRE、權(quán)利要求2-5中任意一項(xiàng)所述的基因表達(dá)載體或者權(quán)利要求7所述的試劑盒在擴(kuò)大AVV病毒載體容量中的應(yīng)用。

11.一種AVV病毒，其特征在于，包括權(quán)利1所述的核苷酸序列tWPRE或者權(quán)利要求2-5中任意一項(xiàng)所述的基因表達(dá)載體。

12.如下a)或b)的應(yīng)用：

a)根據(jù)權(quán)利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或權(quán)利要求2-5中任意一項(xiàng)所述的基因表達(dá)載體在制備權(quán)利要求9所述的試劑盒中的應(yīng)用；

b)根據(jù)權(quán)利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或權(quán)利要求2-5中任意一項(xiàng)所述的基因表達(dá)載體在制備權(quán)利要求11所述的AVV病毒中的應(yīng)用。

13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的AVV病毒在細(xì)胞感染中的應(yīng)用。