[發(fā)明專利]ATP生物熒光lgCB-lgIB標(biāo)曲法檢測抗菌陶瓷抗細(xì)菌性能的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910199712.3
• 申請日: 2019-03-15
• 公開（公告）號: CN110272942A
• 公開（公告）日: 2019-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李文杰;郝凌云;劉曉慧;郭鳳柳;崔宗巖
• 申請（專利權(quán)）人: 李文杰
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12Q1/06;C12N1/20;C12R1/42;C12R1/19;C12R1/445;C12R1/01
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1.一種抗菌陶瓷抗細(xì)菌性能的檢測方法，包括：(1)樣品制備及前處理；(2)設(shè)備選型及試劑、培養(yǎng)基配制；(3)菌種保藏、活化及菌懸液制備；(4)OD值-活菌含量對數(shù)值lgC_B標(biāo)準(zhǔn)曲線建立及接種菌液C_B標(biāo)定；(5)活菌含量對數(shù)值lgC_B-相對熒光強(qiáng)度對數(shù)值lgI_B標(biāo)準(zhǔn)曲線建立；(6)樣品接種、培養(yǎng)及洗脫回收；(7)回收液相對熒光強(qiáng)度值I_B測定；(8)回收液活菌含量C_B和T_B推算及抗菌率R和抗菌活性值A(chǔ)計算；(9)結(jié)果評價；其特征在于，應(yīng)用ATP熒光光度計對以抗菌率R或抗菌活性值A(chǔ)表征的抗菌陶瓷抗細(xì)菌性能進(jìn)行精準(zhǔn)定量測試的ATP生物熒光lgC_B-lgI_B標(biāo)準(zhǔn)曲線法，具體的：

在回收液相對熒光強(qiáng)度值I_B測定中：

明確對照樣品和抗菌樣品的數(shù)量、尺寸及吸水率要求，對樣品采取滅菌和吸水處理；將試驗標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行傳代、活化后，取連續(xù)轉(zhuǎn)接2次的新鮮細(xì)菌培養(yǎng)物制備菌懸液，應(yīng)用MTT比色分析法進(jìn)行活菌計數(shù)，建立OD值-活菌含量對數(shù)值lgC_B標(biāo)準(zhǔn)曲線，推導(dǎo)得出曲線的線性方程式Y(jié)＝a₀X+b₀及相關(guān)系數(shù)R₀²；并對接種菌液進(jìn)行活菌含量C_B標(biāo)定：5.0×10⁶CFU/mL～9.0×10⁶CFU/mL，同時，選擇C_B為4.2×10³CFU/mL、4.2×10⁴CFU/mL、4.2×10⁵CFU/mL的稀釋液作為標(biāo)準(zhǔn)系列菌懸液；測定其相對熒光強(qiáng)度值I_B，繪制lgC_B-lgI_B標(biāo)準(zhǔn)曲線，并推導(dǎo)得出曲線的線性方程式Y(jié)＝a_BX+b_B及相關(guān)系數(shù)R_B²，然后，向各組對照樣品和抗菌樣品待測釉面分別滴加0.3mL菌液；立即用4.7mL洗脫液對6組0h接觸樣品進(jìn)行洗脫回收，應(yīng)用ATP熒光光度計測定回收液的相對熒光強(qiáng)度值I_BC0ij、I_BT0ij，根據(jù)曲線方程式Y(jié)＝a_BX+b_B推算其活菌含量C_BOij和T_BOij，同時，將6組24h接觸樣品密封于無菌平皿內(nèi)，(37±1)℃、(90±2)％RH培養(yǎng)24h±2h后；采用與0h接觸樣品相同的方式回收釉面殘留菌并測定其回收液相對熒光強(qiáng)度值I_BCtij、I_BTtij，推算相應(yīng)的活菌含量C_Btij和T_Btij；

在抗菌率R及抗菌活性值A(chǔ)計算中：

根據(jù)試驗菌種標(biāo)準(zhǔn)曲線lgC_B-lgI_B的線性方程式Y(jié)＝a_BX+b_B，以0h接觸及24h培養(yǎng)后每件對照樣品和抗菌樣品回收液的相對熒光強(qiáng)度測定值和作為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)；在試驗有效條件下，計算其經(jīng)24h培養(yǎng)后的細(xì)菌增長值F_ij、G_ij以及抗菌率R_ij和抗菌活性值A(chǔ)_ij；對每組樣品的R_ij和A_ij取算術(shù)平均值得到相應(yīng)的R_i和A_i；每批抗菌陶瓷樣品的抗菌率R和抗菌活性值A(chǔ)為其3組樣品R_i和A_i的算術(shù)平均值；并明確相關(guān)數(shù)據(jù)修約和測量不確定度要求；

在結(jié)果評價中：

參考衛(wèi)生行業(yè)通用做法和相關(guān)抗菌產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求，確定抗細(xì)菌性能分級判定標(biāo)準(zhǔn)；當(dāng)某組(件)抗菌陶瓷樣品的抗菌率R_i(R_ij)或抗菌活性值A(chǔ)_i(A_ij)與其他兩組(四件)樣品的抗細(xì)菌性能相比至少相差一個水平級時，重新提取一組(件)樣品重復(fù)實驗；計算其經(jīng)ATP生物熒光lgC_B─lgI_B標(biāo)準(zhǔn)曲線法測得的抗菌率或抗菌活性值，如果前后兩組(件)抗菌陶瓷樣品抗細(xì)菌性能水平相同，則棄之；取另外兩組(四件)剩余樣品抗菌率R_i(R_ij)或抗菌活性值A(chǔ)_i(A_ij)的算術(shù)平均值作為該批次(組)抗菌陶瓷樣品抗細(xì)菌性能的評價結(jié)果。