[發明專利]一種簡單高效的單克隆抗體的純化方法在審
| 申請號： | 201910197627.3 | 申請日： | 2019-03-15 |
| 公開（公告）號： | CN109762061A | 公開（公告）日： | 2019-05-17 |
| 發明（設計）人： | 李懷超;李雪嬌;張朔;曹啟江;張敏;唐琳;劉暢;周艷楠;趙洪禮;何向東;何偉 | 申請（專利權）人： | 遼寧何氏醫學院 |
| 主分類號： | C07K16/00 | 分類號： | C07K16/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18 |
| 代理公司： | 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207 | 代理人： | 金春華 |
| 地址： | 110163 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 單克隆抗體 流動相 三羥甲基氨基甲烷緩沖液 提純 透析 氯化鈉 陰離子交換介質 蛋白回收率 混合溶液 批量制備 梯度洗脫 洗脫液 波長 洗脫 柱溫 檢測 | ||
1.一種簡單高效的單克隆抗體的純化方法，其特征在于，包括：
對含有單克隆抗體的樣品進行粗提純；
對所述粗提純的產物進行透析；
利用HPLC法對所述透析的產物進行純化，
其中，所述純化采用陰離子交換介質，以流動相A和流動相B為洗脫液，流速為1～3mL/min，利用梯度洗脫模式進行洗脫，柱溫35～40℃，檢測波長280nm；
所述流動相A為三羥甲基氨基甲烷緩沖液，所述流動相B為三羥甲基氨基甲烷緩沖液和氯化鈉的混合溶液。
2.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述流動相A的pH值為6.5～8.5；所述流動相B的pH值為6.5～8.5。
3.根據權利要求2所述的純化方法，其特征在于，所述三羥甲基氨基甲烷緩沖液的終濃度為10～50mmol/L；所述氯化鈉的終濃度為0.5～1mol/L。
4.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述含有單克隆抗體的樣品包括：含有單克隆抗體的小鼠腹水、含有單克隆抗體的雜交瘤細胞的培養上清、重組單克隆抗體的發酵上清。
5.根據權利要求1或4所述的純化方法，其特征在于，所述單克隆抗體包括：抗人CTGF單克隆抗體或抗人periostin單克隆抗體。
6.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述陰離子交換介質是Q SepharoseFF系列、Capto Q系列、SOURCE Q系列、Propac-wax系列的陰離子交換凝膠。
7.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，選用長度為20～30cm的色譜柱，填料粒徑為2～10μm。
8.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，對含有單克隆抗體的樣品進行粗提純的步驟包括：
基于鹽析法采用飽和硫酸銨溶液對含有單克隆抗體的樣品進行鹽析。
9.根據權利要求8所述的純化方法，其特征在于，所述鹽析法包括：于含有單克隆抗體的樣品中先后加入飽和硫酸銨溶液至終濃度分別為體積百分濃度為40％～60％和30％～40％，分別于4℃鹽析2小時，離心。
10.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，對所述粗提純的產物進行透析的步驟包括：
采用三羥甲基氨基甲烷緩沖液對所述粗提純的產物進行透析。
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