[發明專利]一種快速高效制備總神經節苷脂的方法

在審

• 申請號: 201910197056.3
• 申請日: 2019-03-15
• 公開（公告）號: CN110003287A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 孫國威;阮必武;穆寧
• 申請（專利權）人: 無錫加萊克色譜科技有限公司
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08;C07H15/10
• 代理公司: 無錫大揚專利事務所(普通合伙) 32248
• 代理人: 郭晟杰

本發明涉及生物制藥領域，具體說是一種快速高效制備總神經節苷脂的方法。該方法有效利用了反相層析介質的特點，相比大孔樹脂在常壓下操作，本發明的富集濃縮步驟可在中高壓系統下進行，自動化程度更高，更快的處理浸提液，大大縮短的生產周期，提高了效率，而且產物的質量和產量都得到提高，為后續的轉化、分離工作奠定基礎。

技術領域

本發明涉及生物制藥領域，具體說是一種快速高效制備總神經節苷脂的方法。

背景技術

神經節苷脂(GLS)是存在于細胞膜表面的一類含有唾液酸的酸性鞘糖脂，在神經系統中含量最為豐富，約含0.3％左右。單唾液四己糖神經節苷脂(GM1)是迄今研究最為深入的神經節苷脂成份。GM1是人類細胞膜的天然成份，安全性高，耐受性良好，臨床廣泛應用于腦外傷恢復、腦出血恢復、缺氧缺血性腦病、中樞神經系統損傷、神經退行性疾病如帕金森病、阿爾茲海默病、亨廷頓病，以及外周神經病變方面的治療。

總神經節苷脂（如圖1所示）是豬腦提取的產物，又是GM1生產過程中轉化工藝的底物和中間體，它的數量和質量對轉化效果有直接影響，是后續GM1分離工藝的基礎，也是影響最終產品收率和產品質量的重要環節。

目前國內制備總神經節苷脂的方法第一步通常是以豬腦組織為原料，經過提取、分層、皂化等步驟獲得神經節苷脂浸提液，第二步富集過程除了少數采用超臨界流體萃取（CN 109320566 A、CN 101270137B）或連續多次超濾（CN 104151372、CN 1158295C）外，大多數仍采用大孔樹脂進行吸附濃縮，從而獲得總神經節苷脂（CN 108546276 A、CN 108822164A、CN 104151372 A、CN 102731584 B、CN 101177439 B）。上述富集濃縮方法中，超臨界流體萃取需要在超過30MPa的高壓下操作，對設備安全性要求高，處理量小，而連續多次超濾步驟繁瑣，耗時久，產品純度偏低，因此都難以應用于總神經節苷脂的工業化大規模生產。大孔樹脂吸附雖然具有較強的吸附力，但所有的工藝基本都采用了一步沖洗，一步洗脫，僅能去除部分極性較大的雜質，無法有效分離浸提液中極性較小的磷脂（如圖2所示）和膽固醇（如圖3所示）類雜質，因此導致富集濃縮得到的總神經節苷脂純度偏低，復溶困難，收率較低，而且工業規模樹脂吸附往往需要裝填數千升的樹脂，溶劑消耗大，產生的固體廢物和廢液帶來較大的環保壓力。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種快速高效制備總神經節苷脂的方法，該方法不僅工藝流程簡單，周期短，而且可提高總神經節苷脂的收率和純度。

為解決上述問題，采取以下技術方案：

本發明的快速高效制備總神經節苷脂的方法的特點是包括以下步驟：

步驟一，總神經節苷脂的提取

a.取新鮮豬腦組織，或冷凍豬腦解凍后勻漿，按照豬腦和提取液的質量比1:（5~9）混合，攪拌1-2小時，靜置后抽濾取清液；

b.向a取得的清液中加入0.3-0.4倍清液體積的純水，攪拌0.5h以上，靜置過夜，分層后收集上層清液；

c.向b收集的清液中加入0.3-0.4%氫氧化鈉固體，控制溫度50-60℃進行消化1.5-2h，得到總神經節苷脂浸提液。

步驟二，總神經節苷脂的富集濃縮

a.對步驟一中得到的總神經節苷脂浸提液進行減壓蒸餾，準備進行反相層析吸附；

b.反相層析介質裝填于動態軸向壓縮柱中，以20-25%甲醇水溶液平衡動態軸向壓縮柱，將a中濃縮后的浸提液以10-12BV/h流速上樣至動態軸向壓縮柱中，上樣體積為70-90BV；

c.上樣完成后，繼續用20-25%甲醇水溶液沖洗動態軸向壓縮柱3-5BV，流速5-6BV/h；