[發明專利]一種改良嵌合抗原受體T細胞的制備及其應用在審
| 申請號： | 201910196890.0 | 申請日： | 2019-03-15 |
| 公開（公告）號： | CN109722420A | 公開（公告）日： | 2019-05-07 |
| 發明（設計）人： | 張志杰;聶文冰;劉永軍;尹鴻萍 | 申請（專利權）人： | 江蘇艾洛特醫藥研究院有限公司;江蘇艾洛特生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/867 |
| 代理公司： | 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467 | 代理人： | 王斌 |
| 地址： | 211112 江蘇省南*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 嵌合抗原 慢病毒 改良 制備 腫瘤 細胞免疫治療 實驗步驟 實驗過程 特異靶向 制備過程 殺傷 體外 轉導 應用 增殖 病毒 細胞 改造 | ||
1.一種改良嵌合抗原受體T細胞的制備方法，其特征在于：在T細胞在病毒轉導過程中，將含有IL-7、IL-15和 CAR三種慢病毒同時轉導入T細胞。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的方法由如下步驟實現：
（1）采集健康人外周血，經密度梯度分離獲得外周血單個核細胞，分選后獲得純化的T細胞；
（2）T細胞激活后，取出IL-7、IL-15和 CAR三種慢病毒進行離心共轉導，隨即吸棄病毒上清，更換培養液繼續培養；
（3）將步驟（2）轉導后的T細胞進行流式分析，培養后即得到改良的嵌合抗原受體T細胞。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（1）所述的分選方法采用磁珠陰性分選法。
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（2）所述的T細胞激活技術是采用anti-CD3/anti-CD28偶聯的磁珠進行激活，激活時采用的磁珠與T細胞的加入比例為1:1~3:1。
5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于步驟（2）中離心共轉導，采用的離心轉速為2000-3000 rpm，離心時間為1-3 h。
6.根據權利要求1-2所述得的方法，其特征在于步驟（3）中于轉導后48h進行流式分析轉導效率。
7.根據權利要求1-6任意一項所述的方法，其特征在于：所述的IL-7慢病毒的MOI為5-25，IL-15慢病毒的MOI為5-25，CAR慢病毒的MOI為5-25。
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