[發明專利]絲狀支原體絲狀亞種P35脂蛋白及其在診斷牛傳染性胸膜肺炎中的應用

有效

• 申請號: 201910194597.0
• 申請日: 2019-03-14
• 公開（公告）號: CN109970844B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 辛九慶;李媛
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所（中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心）
• 主分類號: C07K14/30
• 分類號: C07K14/30;C12N15/31;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.絲狀支原體絲狀亞種(Mycoplasma mycoides subsp.Mycoides Small Colony,Mmm)脂蛋白在制備診斷牛傳染性胸膜肺炎藥物中的應用，所述的絲狀支原體絲狀亞種脂蛋白，命名為P35，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的牛傳染性胸膜肺炎是由絲狀支原體絲狀亞種感染引起的。

3.一種用于診斷牛傳染性胸膜肺炎的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中含有絲狀支原體絲狀亞種脂蛋白包被的酶標板，所述的絲狀支原體絲狀亞種脂蛋白，命名為P35，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中還含有辣根過氧化物酶標記的兔抗牛IgG，包被緩沖液、洗滌液、稀釋液、TMB顯色液以及終止液。

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，用于診斷牛傳染性胸膜肺炎時，按照以下步驟進行：

(1)包被：用包被緩沖液將絲狀支原體絲狀亞種脂蛋白稀釋后，加入酶標板中的反應孔中，4℃過夜，次日，棄去孔內溶液，用洗滌液洗3次，每次3分鐘；

(2)加樣：加稀釋后的待檢血清樣品加入上述已包被的反應孔中，置37℃孵育，然后洗滌，同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔；

(3)加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的辣根過氧化物酶標記的兔抗牛IgG，37℃孵育，洗滌；

(4)加底物液顯色：于各反應孔中加入TMB顯色液，37℃10～30分鐘；

(5)終止反應：于各反應孔中加入終止液；

(6)結果判定：在ELISA檢測儀上，于450nm處，測各孔OD值，計算S/P值＝(樣品OD-陰性OD)/(陽性OD-陰性OD)。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，絲狀支原體絲狀亞種脂蛋白的包被濃度為0.15μg/mL；待檢血清樣品的稀釋度為1:80，孵育時間為1h；辣根過氧化物酶標記的兔抗牛IgG的稀釋度為1:8000，孵育時間為1h；TMB顯色時間為10min。

7.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，結果判定中，cut-off值為0.36。