[發(fā)明專利]一種人體口腔黏膜模型及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910191696.3
• 申請日: 2019-03-14
• 公開（公告）號: CN109880792A
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳敏珊;李平;李林;王真史
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州薇美姿實(shí)業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/077
• 代理公司: 廣東翰銳律師事務(wù)所 44442
• 代理人: 陳業(yè)勝;蘇少華

1.一種人體口腔黏膜模型，其特征在于，包括自下而上排列的基底層、固有層和上皮層，所述固有層包括口腔成纖維細(xì)胞和生物支架材料，所述上皮層包括口腔上皮細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人體口腔黏膜模型，其特征在于，所述基底層包括支撐膜，所述支撐膜所使用的材料是尼龍膜、硅膠膜、橡膠膜或合成高分子材料膜。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人體口腔黏膜模型，其特征在于，所述口腔成纖維細(xì)胞為可向成纖維細(xì)胞分化的干細(xì)胞或口腔組織分離培養(yǎng)的原代細(xì)胞或商業(yè)化的永生口腔成纖維細(xì)胞；所述生物支架材料的來源為膠原蛋白、細(xì)胞外基質(zhì)復(fù)合物、透明質(zhì)酸、多糖、硫酸軟骨素、聚乳酸、聚羥基乙酸、聚乳酸和聚羥基乙酸的共聚物中的一種或兩者以上混合物；所述口腔上皮細(xì)胞包括口腔角質(zhì)細(xì)胞，其來源為可向角質(zhì)細(xì)胞分化的干細(xì)胞或口腔組織分離培養(yǎng)的原代細(xì)胞或商業(yè)化的永生口腔角質(zhì)細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人體口腔黏膜模型，其特征在于，所述成纖維細(xì)胞復(fù)合于生物支架材料內(nèi)部。

5.一種人體口腔黏膜模型的制備方法，其特征在于，包括如下步驟:

(1)口腔上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)；

(2)基底層的配置：取DMEM培養(yǎng)基、牛血清、生物支架材料混合，調(diào)節(jié)pH值至pH7.0-pH7.6后，置于支撐膜上，固化；

(3)固有層的配置：取DMEM培養(yǎng)基、牛血清、生物支架材料混合，調(diào)節(jié)pH值至pH7.0-pH7.4后，加入成纖維細(xì)胞，置于所述基底層之上，固化之后，加入成纖維培養(yǎng)基培養(yǎng)；

(4)上皮層的配置：取上皮細(xì)胞平鋪于所述固有層，孵育，加入上皮培養(yǎng)基培養(yǎng)；

(5)全層口腔黏膜的形成和成熟：將上皮培養(yǎng)基舍棄，進(jìn)行氣液界面培養(yǎng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述上皮層的配置中，上皮細(xì)胞的添加量為5×10⁵-5×10⁷個/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述固有層的配置中，成纖維細(xì)胞的添加量為1×10⁵-1×10⁷個/mL。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，上皮層和固有層的配置中上皮和成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基包括以下含量的各個組分：

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述全層口腔黏膜的成熟中，所述氣液界面培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括以下含量的各個組分：