[發(fā)明專利]一種人體口腔黏膜模型及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910191696.3
• 申請(qǐng)日: 2019-03-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109880792A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳敏珊;李平;李林;王真史
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州薇美姿實(shí)業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12N5/077
• 代理公司: 廣東翰銳律師事務(wù)所 44442
• 代理人: 陳業(yè)勝;蘇少華

本發(fā)明屬于組織工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種人體口腔黏膜模型及其制備方法，該黏膜模型包括基底層以及固有層之外，還包括上皮層，從而高度接近人體口腔黏膜的上皮組織的結(jié)構(gòu)。該模型可以應(yīng)用于口腔護(hù)理產(chǎn)品、小分子化合物、活性蛋白、醫(yī)療器械、化學(xué)品、一次性衛(wèi)生用品等產(chǎn)品的安全性與功效性檢測(cè)及其他與口腔黏膜接觸的材料的安全性與功效性評(píng)價(jià)，并且使得到的檢測(cè)數(shù)據(jù)與評(píng)價(jià)結(jié)果更接近口腔黏膜的測(cè)評(píng)結(jié)果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于組織工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種人體口腔黏膜模型及其制備方法。

背景技術(shù)

2009年3月，歐盟化妝品法規(guī)(EC)1223/2009正式實(shí)施，已禁止化妝品、化學(xué)品等的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。而傳統(tǒng)的2D模型只能用于研究細(xì)胞遷移和增殖，無(wú)法用于口腔黏膜的功能、藥物經(jīng)皮吸收及病理學(xué)研究。與3D模型相比，2D模型的細(xì)胞行為表現(xiàn)有顯著差異，在2D培養(yǎng)模型下篩選出的有效原料或產(chǎn)品用于臨床療效不理想。但是人體來(lái)源的口腔黏膜組織主要存在取材困難、來(lái)源有限，不能滿足口腔相關(guān)產(chǎn)品體外評(píng)價(jià)數(shù)量需求。

歐洲、美國(guó)、日本等世界發(fā)達(dá)地區(qū)或國(guó)家已成立動(dòng)物實(shí)驗(yàn)替代機(jī)構(gòu)旨在積極推動(dòng)替代方法進(jìn)行更為系統(tǒng)而深入的研究，目前已順利完成相關(guān)技術(shù)儲(chǔ)備，并通過(guò)立法程序建立起相應(yīng)的技術(shù)性貿(mào)易措施體系。

我國(guó)現(xiàn)也已有和國(guó)際接軌的相關(guān)法律法規(guī)，以體外替代試驗(yàn)方法取代傳統(tǒng)的動(dòng)物試驗(yàn)。GB/T16886-1《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第1部分：評(píng)價(jià)與試驗(yàn)》提到：只要科學(xué)上證明能獲得與動(dòng)物試驗(yàn)同樣的信息，建議優(yōu)先采用體外模式。

在此背景下，以正常的人體口腔黏膜生理結(jié)構(gòu)和功能為基礎(chǔ),利用組織工程原理和技術(shù)構(gòu)建的3D口腔黏膜模型成為未來(lái)首選的生物學(xué)評(píng)價(jià)工具。

正常的人體口腔黏膜生理結(jié)構(gòu)包括固有層和上皮層，其中，上皮層為復(fù)層鱗狀上皮，主要由角質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成，此外還有少數(shù)非角質(zhì)細(xì)胞。固有層由致密的結(jié)締組織組成。固有層的基本細(xì)胞成分是成纖維細(xì)胞，有合成和更新纖維及基質(zhì)的功能。固有層的纖維主要是Ⅰ型膠原纖維。

現(xiàn)有技術(shù)的組織工程口腔黏膜模型只構(gòu)建了口腔黏膜上皮層，并且以口腔黏膜鱗狀癌細(xì)胞為種子細(xì)胞。因此現(xiàn)有技術(shù)模型構(gòu)建而成的結(jié)構(gòu)不能很好的反映人天然口腔黏膜結(jié)構(gòu)。例如，專利CN 105255833 A公開(kāi)了一種口腔黏膜上皮模型及其體外構(gòu)建方法，使用口腔黏膜鱗狀癌細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增后，采用氣液面培養(yǎng)法，使其復(fù)層化，形成體外口腔黏膜上皮模型。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是，提供一種人體口腔黏膜模型及其制備方法，構(gòu)建與人體口腔黏膜上皮組織的結(jié)構(gòu)及功能高度相似的體外口腔黏膜上皮模型。

為了達(dá)到上述技術(shù)目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

本發(fā)明提供一種人體口腔黏膜模型，包括自下而上排列的基底層、固有層和上皮層，所述固有層包括口腔成纖維細(xì)胞和生物支架材料，所述上皮層包括口腔上皮細(xì)胞。

優(yōu)選地，所述基底層包括支撐膜，所述支撐膜所使用的材料可以是尼龍膜、硅膠膜、橡膠膜或合成高分子材料膜。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的制備方法中所用的支撐膜為合成高分子材料膜，PE膜或PET膜。

優(yōu)選地，所述口腔成纖維細(xì)胞的來(lái)源不受本發(fā)明的限制，可以為可向成纖維細(xì)胞分化的干細(xì)胞，也可以為口腔組織分離培養(yǎng)的原代細(xì)胞，也可為商業(yè)化的永生口腔成纖維細(xì)胞。

優(yōu)選地，所述生物支架材料的來(lái)源不受本發(fā)明的限制，可以為膠原蛋白、細(xì)胞外基質(zhì)復(fù)合物、透明質(zhì)酸、多糖、硫酸軟骨素、聚乳酸、聚羥基乙酸、聚乳酸和聚羥基乙酸的共聚物中的一種或兩者以上混合物。

優(yōu)選地，所述口腔上皮細(xì)胞包括口腔角質(zhì)細(xì)胞，其來(lái)源不受本發(fā)明的限制，可以為可向角質(zhì)細(xì)胞分化的干細(xì)胞，也可以為口腔組織分離培養(yǎng)的原代細(xì)胞，也可為商業(yè)化的永生口腔角質(zhì)細(xì)胞。