[發(fā)明專利]一種血漿中曲司氯銨的定量檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910185419.1
• 申請(qǐng)日: 2019-03-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109884205A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李高;張媛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 康誠(chéng)科瑞醫(yī)藥研發(fā)（武漢）有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 成都頂峰專利事務(wù)所(普通合伙) 51224
• 代理人: 陳夏

本發(fā)明屬于曲司氯銨檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種血漿中曲司氯銨的定量檢測(cè)方法，包括如下步驟：(1)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：分別將所述曲司氯銨儲(chǔ)備液用體積比為1:1的甲醇水溶液稀釋成多個(gè)曲司氯銨工作溶液；內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液用體積比為1:1的甲醇水溶液稀釋成濃度為10～20ng·mL^?1的內(nèi)標(biāo)工作溶液；(2)待測(cè)血漿樣品前處理過(guò)程；(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：以曲司氯銨和曲司氯銨?d8的色譜峰面積比為縱坐標(biāo)，以曲司氯銨的血藥濃度與曲司氯銨?d8的血藥濃度的比值為橫坐標(biāo)，采用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行線性回歸制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝a+bX；(4)根據(jù)回歸方程計(jì)算待測(cè)血漿樣品中的曲司氯銨的血藥濃度。本發(fā)明采用液相色譜?質(zhì)譜/質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定，靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于曲司氯銨檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種血漿中曲司氯銨的定量檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

曲司氯銨(trospium chloride)是一種人工合成的具有4個(gè)銨基結(jié)構(gòu)的托品酸衍生物，屬于副交感神經(jīng)的阻滯藥，作用類似于阿托品，主要通過(guò)與內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合突觸后膜M-受體而起作用，對(duì)有副交感神經(jīng)支配的器官起著降低副交感神經(jīng)張力、去除因副交感神經(jīng)引起的平滑肌痙攣的作用，對(duì)胃腸、膽道和泌尿道也有一定作用。本品脂溶性低而不易通過(guò)血腦屏障，不會(huì)產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)副作用。曲司氯銨臨床用于以下癥狀的治療：尿頻，夜尿癥，非激素或器質(zhì)病變所致膀胱功能紊亂(膀胱刺激、尿急)。和所有的季銨化合物一樣，曲司氯銨有較強(qiáng)的水溶性，但口服吸收差，絕對(duì)生物利用度約為9.6％，進(jìn)食后在此基礎(chǔ)上繼續(xù)下降約26％。藥物吸收后約85％以原型經(jīng)腎排泄，其余15％經(jīng)肝代謝。較低的給藥劑量和生物利用度，導(dǎo)致本品血藥濃度低，常規(guī)分析方法不能滿足生物樣品的測(cè)定要求。目前，已經(jīng)建立的生物樣品中曲司氯銨測(cè)定方法有柱前衍生化HPLC結(jié)合熒光檢測(cè)、放射免疫法和GC-MS，但這些方法的檢測(cè)靈敏度尚需提高。

為此，本發(fā)明提出一種血漿中曲司氯銨的定量檢測(cè)方法，利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜/質(zhì)譜(LC-MS/MS)法定量檢測(cè)犬血漿中曲司氯銨的血藥濃度，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜/質(zhì)譜(LC-MS/MS)法可以克服背景干擾，對(duì)復(fù)雜樣品仍可達(dá)到很高的靈敏度，且具有分辨率高、質(zhì)量范圍寬及掃描快等優(yōu)點(diǎn)，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜/質(zhì)譜法已成為現(xiàn)代分析手段中必不可少的組成部分。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明目的在于提供一種血漿中曲司氯銨的定量檢測(cè)方法，利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜/質(zhì)譜(LC-MS/MS)法定量檢測(cè)犬血漿中曲司氯銨的血藥濃度，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜/質(zhì)譜(LC-MS/MS)法可以克服背景干擾，對(duì)復(fù)雜樣品仍可達(dá)到很高的靈敏度，且具有分辨率高、質(zhì)量范圍寬及掃描快等優(yōu)點(diǎn)，該方法采用沉淀前處理、LC-MS/MS質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，操作簡(jiǎn)單，分離效果好，定性準(zhǔn)確，樣品分析時(shí)間短，檢測(cè)靈敏度高。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：

一種血漿中曲司氯銨的定量檢測(cè)方法包括如下步驟：

(1)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：稱取曲司氯銨至玻璃瓶中，加入甲醇，配制成濃度為1～10mg·mL^-1的曲司氯銨儲(chǔ)備液，分別將所述曲司氯銨儲(chǔ)備液用體積比為1:1的甲醇水溶液稀釋成多個(gè)曲司氯銨工作溶液，多個(gè)曲司氯銨工作溶液的濃度各不相同；稱取曲司氯銨-d8至玻璃瓶中，加入甲醇配制成濃度為1～10mg·mL^-1的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用體積比為1:1的甲醇水溶液稀釋成濃度為10～20ng·mL^-1的內(nèi)標(biāo)工作溶液；曲司氯銨工作溶液及內(nèi)標(biāo)工作溶液均在-20℃下保存，備用；

(2)待測(cè)血漿樣品前處理過(guò)程：取待測(cè)血漿樣品，向待測(cè)血漿樣品中加入步驟(1)的內(nèi)標(biāo)工作溶液，然后加入乙腈沉淀劑，渦旋混合，離心取上清液并向上清液中加入純化水，振蕩混勻，進(jìn)行液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定，得待測(cè)血漿樣品對(duì)應(yīng)的曲司氯銨和曲司氯銨-d8的色譜圖；