[發(fā)明專利]基于定點(diǎn)基因質(zhì)譜檢測(cè)的鴨源病毒檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910184248.0
• 申請(qǐng)日: 2019-03-12
• 公開（公告）號(hào): CN110093452B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉寧;周曉光;李運(yùn)濤;佟雪梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 融智生物科技（青島）有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

本發(fā)明公開一種基于定點(diǎn)基因質(zhì)譜檢測(cè)的鴨源病毒檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法，涉及分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。所述鴨源病毒檢測(cè)試劑盒包括用于檢測(cè)10種鴨源病毒的PCR引物及質(zhì)量探針；本發(fā)明還提供一種可同時(shí)檢測(cè)10種鴨源病毒的檢測(cè)方法，該方法至少包括多重PCR、質(zhì)量探針延伸、質(zhì)譜分析檢測(cè)步驟，該方法靈敏度高、成本低、特異性好，可以實(shí)現(xiàn)不同鴨源病毒的多重檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一種基于定點(diǎn)基因質(zhì)譜檢測(cè)的鴨源病毒檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

鴨病毒病是危害養(yǎng)鴨業(yè)的主要疫病。鴨肝炎病毒、鴨星狀病毒、鴨腸炎病毒和鴨呼腸孤病毒是引起鴨病的經(jīng)典毒株。20世紀(jì)90年代以來，禽流感病毒稱為危害養(yǎng)鴨業(yè)的重要病原。近年來，我國(guó)鴨群中出現(xiàn)了許多新的病毒病，給養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。例如，番鴨“白點(diǎn)病”、由新型鴨肝炎病毒和星狀病毒引起的鴨病毒性肝炎、番鴨“新肝病”和北京鴨“脾壞死病”等。自2010年以來，坦布蘇病毒感染遍布我國(guó)蛋鴨主產(chǎn)區(qū)，導(dǎo)致產(chǎn)蛋下降及死亡。2015年，櫻桃谷北京鴨感染鵝細(xì)小病毒發(fā)生了短喙和侏儒綜合征。目前比較流行的鴨病毒性傳染病的主要病原包括鴨甲肝病毒1型(DHAV-1)、鴨甲肝病毒3型、鴨星狀病毒1型、鴨星狀病毒2型、鴨呼腸孤病毒1型、鴨呼腸孤病毒2型、坦布蘇病毒、禽流感病毒、鵝細(xì)小病毒和鴨腸炎病毒。這10種病毒包括RNA病毒和DNA病毒，對(duì)這10種病毒進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)對(duì)于鴨病毒病的防控具有重要意義。

針對(duì)致病病毒的常見診斷方法包括病毒培養(yǎng)、分子診斷方法和血清學(xué)檢測(cè)等。其中，病毒培養(yǎng)方法包括在胚胎和細(xì)胞上分離病毒；分子診斷方法包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、多重PCR(mPCR)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)等；血清學(xué)檢測(cè)方法包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。在臨床上，病毒分離耗時(shí)較長(zhǎng)，且有些病毒例如鴨星狀病毒的分離培養(yǎng)較困難；血清學(xué)檢測(cè)一般是針對(duì)血清中特定病原的抗體進(jìn)行檢測(cè)，一般用于檢測(cè)抗體水平；近年來，分子生物學(xué)技術(shù)得到了快速發(fā)展，PCR技術(shù)具有以其靈敏、快速和特異等特征得到了廣泛應(yīng)用。一般來講，普通PCR技術(shù)一般只用于檢測(cè)一種病毒，靈敏性一般可以檢測(cè)到10²～10³拷貝；熒光定量PCR技術(shù)的靈敏度較高，可達(dá)到10¹～10²拷貝，但由于熒光通道的限制，一般也只用于3種病原以下的同時(shí)檢測(cè)。最近，還有研究者開發(fā)了一種基于毛細(xì)管電泳的鴨病毒檢測(cè)的GeXP方法，雖然該方法所檢測(cè)的病毒包括11種，但是并不包括近期比較流行的鵝細(xì)小病毒和鴨星狀病毒等病毒，且該方法在11種病毒均存在的情況下靈敏度僅為10³拷貝，并且在結(jié)果判斷方面存在較大的人為誤差。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種可同時(shí)檢測(cè)十種鴨源病毒的檢測(cè)試劑盒，利用該試劑盒進(jìn)行鴨源病毒檢測(cè)的。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種利用上述試劑盒進(jìn)行鴨源病毒檢測(cè)的方法。

為達(dá)到上述第一個(gè)目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

一組基于定點(diǎn)基因質(zhì)譜檢測(cè)的鴨源病毒檢測(cè)引物和探針，包括：