[發(fā)明專利]基于定點基因質(zhì)譜檢測的鴨源病毒檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910184248.0
• 申請日: 2019-03-12
• 公開（公告）號: CN110093452B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉寧;周曉光;李運濤;佟雪梅
• 申請（專利權(quán)）人: 融智生物科技（青島）有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

1.一組基于定點基因質(zhì)譜檢測的鴨源病毒檢測引物和探針，其特征在于，包括：

鴨甲肝病毒1型的PCR引物序列SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和質(zhì)量探針SEQ ID No.23；鴨甲肝病毒3型的PCR引物序列SEQ ID No.3、SEQ ID No.4和質(zhì)量探針SEQ ID No.24；鴨星狀病毒1型的PCR引物序列SEQ ID No.5、SEQ ID No.6和質(zhì)量探針SEQ ID No.25；鴨星狀病毒2型的PCR引物序列SEQ ID No.7、SEQ ID No.8和質(zhì)量探針SEQ ID No.26；鴨呼腸孤病毒1型的PCR引物序列SEQ ID No.9、SEQ ID No.10和質(zhì)量探針SEQ ID No.27；鴨呼腸孤病毒2型的PCR引物序列SEQ ID No.11、SEQ ID No.12和質(zhì)量探針SEQ ID No.28；坦布蘇病毒的PCR引物序列SEQ ID No.13、SEQ ID No.14和質(zhì)量探針SEQ ID No.29；禽流感病毒的PCR引物序列SEQ ID No.15、SEQ ID No.16和質(zhì)量探針SEQ ID No.30；小鵝瘟病毒的PCR引物序列SEQID No.17、SEQ ID No.18和質(zhì)量探針SEQ ID No.31；鴨腸炎病毒的PCR引物序列SEQ IDNo.19、SEQ ID No.20和質(zhì)量探針SEQ ID No.32；內(nèi)參基因β-actin的PCR引物序列SEQ IDNo.21、SEQ ID No.22和質(zhì)量探針SEQ ID No.33。

2.一種基于定點基因質(zhì)譜檢測的鴨源病毒檢測試劑盒，其特征在于，所述鴨源病毒檢測試劑盒包括如權(quán)利要求1所述的鴨源病毒檢測引物和探針。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鴨源病毒檢測試劑盒，其特征在于，PCR引物序列SEQ IDNo.1-SEQ ID No.22的5’端修飾有如SEQ ID No.56所示的堿基序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鴨源病毒檢測試劑盒，其特征在于，所述鴨源病毒檢測試劑盒還包括進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)所需的試劑。

5.一種非診斷目的定點基因質(zhì)譜法檢測鴨源病毒多重PCR產(chǎn)物的方法，其特征在于，所述方法利用如權(quán)利要求2所述的試劑盒同時檢測鴨甲肝病毒1型、鴨甲肝病毒3型、鴨星狀病毒1型、鴨星狀病毒2型、鴨呼腸孤病毒1型、鴨呼腸孤病毒2型、坦布蘇病毒、禽流感病毒、小鵝瘟病毒和鴨腸炎病毒10種病毒和1種內(nèi)參基因β-actin。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法至少包括以下步驟：

利用多重PCR技術(shù)同時擴(kuò)增待檢樣品中的十種鴨源病毒的目的基因和內(nèi)參基因β-actin；

將質(zhì)量探針混合并對質(zhì)量探針混合物進(jìn)行特異的單個堿基延伸；

利用質(zhì)譜檢測質(zhì)量探針的單個堿基延伸產(chǎn)物，并對質(zhì)譜檢測結(jié)果進(jìn)行分析。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，質(zhì)譜檢測采用的是基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜MALDI-TOF MS。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，對質(zhì)譜檢測結(jié)果進(jìn)行分析時使用的是基因分型系統(tǒng)。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，質(zhì)量探針混合物中各個質(zhì)量探針的濃度分別為：β-actin質(zhì)量探針6.80μM、禽流感病毒質(zhì)量探針6.00μM、坦布蘇病毒質(zhì)量探針7.20μM、鴨甲肝病毒1型質(zhì)量探針13.60μM、小鵝瘟病毒質(zhì)量探針6.00μM、鴨呼腸孤病毒1型質(zhì)量探針10.00μM、鴨星狀病毒2型質(zhì)量探針6.80μM、鴨星狀病毒1型質(zhì)量探針7.20μM、鴨呼腸孤病毒2型質(zhì)量探針15.60μM、鴨腸炎病毒質(zhì)量探針12.00μM、鴨甲肝病毒3型質(zhì)量探針21.60μM。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增時，10種病毒和1種內(nèi)參基因的22條PCR引物在反應(yīng)體系中等摩爾混合。