[發(fā)明專利]一種用于檢測D型流感病毒D/660分支的熒光定量PCR檢測材料及試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910184009.5 | 申請日： | 2019-03-12 |
| 公開（公告）號： | CN109929948A | 公開（公告）日： | 2019-06-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 羅開健;張奇;馮賽祥;孫海亮;王曉冰;柳子巍;謝嘉渠;施建鑫 | 申請（專利權(quán)）人： | 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205 | 代理人： | 胡輝 |
| 地址： | 510000 廣東省廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 流感病毒 熒光定量PCR檢測 材料及試劑 特異性熒光 后引物 前引物 探針 特異性熒光探針 淬滅基團 定量檢測 熒光基團 經(jīng)驗證 檢測 引物 | ||
1.一種用于檢測D型流感病毒D/660分支的熒光定量PCR材料，包括qPCR前引物、qPCR后引物和特異性熒光定量探針，
qPCR前引物序列為：
GCAAAGAAGTTTCGGTCATTGTC(SEQ ID NO.1)
qPCR后引物序列為：
CCAGTTTACCCCTTCATAAAATA(SEQ ID NO.2)
特異性熒光定量探針序列為：
熒光基團-AAAAGCCGACAACATCAACGAAGC-淬滅基團(SEQ ID NO.3)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測材料，其特征在于，所述特異性熒光定量探針的熒光基團為FAM熒光基團；所述猝滅基團為BHQ1淬滅基團。
3.一種用于檢測D型流感病毒D/660分支的熒光定量PCR檢測試劑盒，包括反轉(zhuǎn)錄酶與抑制劑、熒光定量PCR酶混合液，陽性對照樣品、陰性對照樣品和ddH2O，其中熒光定量PCR酶混合液中包括權(quán)利要求1或2任一所述的熒光定量PCR檢測材料。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述qPCR前引物、qPCR后引物的濃度為10μmol/L，所述特異性熒光定量探針的濃度為10μmol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照為含有所述qPCR前引物與所述qPCR后引物擴增片段的18-T載體質(zhì)粒溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性對照為18-T載體質(zhì)粒溶液。
8.一種權(quán)利要求4至7任一所述用于檢測D型流感病毒D/660分支的熒光定量PCR檢測試劑盒的檢測方法，包括以下步驟：
S1.利用TRIZOL方法提取待測樣品的RNA；
S2.將待測樣品中的RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA；
S3.于待測樣品的cDNA中加入熒光定量PCR酶混合液，進行熒光定量PCR檢測。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR的反應(yīng)體系為20μL，其中，熒光定量PCR酶混合液Luna universaprobeQpcr Mix 10μL，待測樣品的cDNA 2μL，加Nuclease-free H2O補充至20μL；所述熒光定量PCR酶混合液中含有濃度為10μM的qPCR前引物0.8μL，濃度為10μM的qPCR后引物0.8μL，濃度為10μM的探針0.4μL。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR的反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性60秒，95℃15秒，60℃30s，共40～45個循環(huán)。
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