[發明專利]C4植物葉肉細胞、維管束鞘細胞的類囊體膜的分離提取方法在審
| 申請號： | 201910179907.1 | 申請日： | 2019-03-11 |
| 公開（公告）號： | CN109722409A | 公開（公告）日： | 2019-05-07 |
| 發明（設計）人： | 林雪喬;劉明媚;李秀秀;秦曉春 | 申請（專利權）人： | 濟南大學 |
| 主分類號： | C12N5/04 | 分類號： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 濟南泉城專利商標事務所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250022 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 類囊體膜 維管束鞘細胞 葉肉細胞 分離提取 生物技術領域 工藝提取 機械作用 處理量 酶解法 破壁機 檔位 蛋白 | ||
1.一種C4植物葉肉細胞和維管束鞘細胞的類囊體膜的分離提取方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）取C4植物的葉片，清洗后擦掉水分，去掉葉片中間的葉脈，將葉片剪成0.5-1cm小條；
（2）取剪碎的葉片放入在冰箱提前預冷的破壁機中，加入預冷后的搗碎液，破碎至葉片外層的葉肉細胞80-90％掉落；
（3）低溫過濾，搗碎液涮洗破壁機，再過濾，合并濾液，即為葉肉細胞；
（4）將步驟（3）的濾渣加入預冷后的搗碎液，繼續破碎至葉肉細胞90-99%及以上掉落；過濾，留濾渣，棄濾液；
（5）將步驟（4）的濾渣加入預冷后的搗碎液，破碎至維管束鞘細胞80-95%及以上掉落，過濾，濾液即為維管束鞘細胞；
（6）將步驟（3）的葉肉細胞，離心，加入預冷后的漲破液，攪拌，離心，加貯存液，放入液氮迅速冷凍放-80℃冰箱保存，得到葉肉細胞的類囊體膜；
（7）將步驟（5）得到的維管束鞘細胞，離心，加入預冷后的漲破液，攪拌，離心，加貯存液，放入液氮迅速冷凍放-80℃冰箱保存，得到維管束鞘細胞的類囊體膜。
2. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟（2）-（5）中的搗碎液為蔗糖、NaCl、Tricine的混合液，所述的蔗糖的終濃度為0.3M；NaCl的終濃度為15mM；Tricine的終濃度為30 mM，NaOH調pH為8.0。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟（2）中的搗碎液的用量為5-10ml/g葉片。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟（6）、（7）中的漲破液為Tricine溶液，濃度為15mM，且用NaOH調整pH至8.0。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟（6）、（7）中的漲破液的用量為2-5ml/g葉片。
6. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟（6）、（7）中的存貯液為蔗糖、Tricine的混合液，所述的蔗糖的終濃度為0.3M；Tricine的終濃度為20 mM；NaOH調pH為8.0。
7.采用權利要求1的方法制備得到的葉肉細胞的類囊體膜。
8.采用權利要求1的方法制備得到的維管束鞘細胞的類囊體膜。
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