[發明專利]一種虎奶菇的發酵培養方法以及從培養物中提取活性成分的方法

在審

• 申請號: 201910179289.0
• 申請日: 2019-03-11
• 公開（公告）號: CN109762745A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 單保恩;姚清國;姚定一;趙連梅;桑梅香;張靜;劉飛;米夢粽
• 申請（專利權）人: 河北醫科大學第四醫院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A61K36/07;A61P35/00;A61P11/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 王睿

本發明提出了一種虎奶菇的發酵培養方法，該方法通過對虎奶菇最適培養溫度、生長時間、搖床轉速以及pH四個方面對其發酵條件進行研究，得到最適宜的發酵培養條件。本發明還提出了從得到的發酵培養物中提取活性成分的方法，該方法采用有機溶劑對得到的真菌菌絲進行提取，得到虎奶菇活性成分提取液。實驗證明通過MTT法篩選出的虎奶菇有效成分具有抗腫瘤活性，對肺癌細胞的抑制率在80％以上。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，具體涉及一種虎奶菇的發酵培養方法，以及從得到的發酵培養物中提取活性成分的方法。

背景技術

虎奶菇(Pleurtus tuberregium)，又名核耳菇、菌核側耳、茯苓側耳、虎奶菌等，是生長于熱帶與亞熱帶地區的一種珍稀食用與藥用真菌。虎奶菇的結構可分為菌絲體和子實體兩部分，菌絲體存在于基質內，具有貯存、分解以及運輸的功能。子實體存在于基質外，具有食用與繁殖的功能。菌核呈不規則的團塊狀，類似于圓形或者扁球形，大小不一，并且表面多為黃白色，少數呈淺黃色，成熟時外皮為紅褐色，內部接近白色，體輕、質松，能浮于水面，有顆粒性，氣微、味淡，嚼之有顆粒感，具有微黏性。菌蓋形如漏斗或杯狀，平整且中心下凹，初期肉質表面光滑，中部有小的平伏狀鱗片，呈灰白色至紅褐色。由于它對生長環境要求苛刻，自然生長周期長，因此隨著環境的破壞，虎奶菇菌核的產量越來越少，難以滿足醫藥及保健上的廣泛應用。

虎奶菇性味甘、溫、補氣益血，具有滋補強壯、健脾胃、降血脂、防病治病、提高免疫力以及消除肺部污染物的功效，同時也適用于動脈硬化、冠心病、高血壓以及重癥肌無力的治療，并且對慢性、過敏性、虛寒型頑咳、哮喘也有較為神奇的療效。此外虎奶菇的營養極為豐富，富含氨基酸、蛋白質、纖維素、真核多糖和礦物質等營養成分。在東南亞國家以及我國的沿海地區，虎奶菇主要作用為強壯補品來食用，同時也是一味能夠止咳平喘的中藥。虎奶菇的菌核具有極強的抗病能力，其成品放置在室內干燥的環境下，保存時間長，質不變，蟲不蛀，病菌、病毒不侵，霉菌不入，藥性功效不變，入藥極佳。

目前在國內外，虎奶菇的栽培方法與普通食用菌的栽培方法相近，如OkhuoyaJ.A.等用鉆孔的塑料袋分別裝香蕉葉、玉米棒子、廢棉、稻草、麥稈等農業廢料，接入虎奶菇菌絲，28～32℃黑暗培養3.5月，虎奶菇形成菌核并長出子實體，生物學效率香蕉葉最低，為13.58％；廢棉最高，為30.11％。

黃年來等自1993年起對虎奶菇的栽培方法進行了多方面的研究。在夏秋雨后，將子實體連同菌核挖出，經過晾出水分與表面滅菌的過程后在PDA培養基中獲得純菌種；使用闊葉樹雜木屑、麩皮、棉籽殼等為培養基，在自然條件下，30℃～35℃袋料培養；30～45天潔白菌絲長滿菌袋，4個月后可以采收菌核(120g-150g)。目前，虎奶菇人工栽培方法主要有兩種，其一為袋培，利用木屑或者其他農作物秸稈麩皮培養料進行袋培，使之長出子實體或者形成菌棱；其二為利用闊葉樹的短椴木進行窖栽，其方法和茯苓筒木窖栽方法相似，只是不能利用松木而已。

雖然研究者普遍認為，液體深層發酵是生產菌絲最高效且產量最大的方法，但是有關虎奶菇液態培養獲取菌種的工藝研究還需要完善。并需要對虎奶菇的有效成分進行藥理藥效分離提取。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種虎奶菇的發酵培養方法。

本發明的第二目的在于提供從上述得到的發酵培養物中提取活性成分的方法。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：

本發明涉及一種虎奶菇的發酵培養方法，所述方法包括以下步驟：

(1)制備液體培養基，所述液體培養基中含有土豆150～250g/L，葡萄糖15～25g/L，無水硫酸鎂0.3～0.8g/L，磷酸二氫鉀0.5～1.5g/L，瓊脂5-6g/L，亞硒酸鈉200～1000μg/L，余量為水。