[發(fā)明專利]一種虎奶菇的發(fā)酵培養(yǎng)方法以及從培養(yǎng)物中提取活性成分的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910179289.0
• 申請(qǐng)日: 2019-03-11
• 公開（公告）號(hào): CN109762745A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 單保恩;姚清國(guó);姚定一;趙連梅;桑梅香;張靜;劉飛;米夢(mèng)粽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;A61K36/07;A61P35/00;A61P11/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京細(xì)軟智谷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11471
• 代理人: 王睿

1.一種虎奶菇的發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)制備液體培養(yǎng)基，所述液體培養(yǎng)基中含有土豆150～250g/L，葡萄糖15～25g/L，無水硫酸鎂0.3～0.8g/L，磷酸二氫鉀0.5～1.5g/L，瓊脂5-6g/L，亞硒酸鈉200～1000μg/L，余量為水；

(2)將所述液體培養(yǎng)基滅菌后，進(jìn)行無菌接種，并在24～29℃，100～180r/min的轉(zhuǎn)速下培養(yǎng)5～9天，得到發(fā)酵培養(yǎng)物；

(3)將所述發(fā)酵培養(yǎng)物抽濾后清洗，得到虎奶菇菌絲。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述液體培養(yǎng)基通過以下方法制備得到：

[1]將土豆切片后，加水煮沸4～7min，得到混合液；

[2]將所述混合液過濾后得到濾液，并向所述濾液中加入無水硫酸鎂、磷酸二氫鉀、亞硒酸鈉、葡萄糖和瓊脂，煮沸使其完全溶解，得到溶液；

[3]將所述溶液定容至1000mL，得到所述液體培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述液體培養(yǎng)基的pH值為5～8，優(yōu)選為7。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，滅菌在高壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行，條件為121℃下滅菌20min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，培養(yǎng)條件為在25℃，120r/min的轉(zhuǎn)速下培養(yǎng)7天。

6.一種從虎奶菇發(fā)酵培養(yǎng)物中提取活性成分的方法，其特征在于，所述方法包括：向權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)方法培養(yǎng)得到的虎奶菇菌絲中加入有機(jī)溶劑浸泡，抽濾后得到濾液，所述濾液即為虎奶菇活性成分提取液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑選自石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、乙醚中的至少一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述浸泡時(shí)間為15～30h。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，將得到所述提取液蒸發(fā)濃縮后進(jìn)行真空干燥，向得到膏狀物中加入二甲基亞砜溶解，然后在硅膠柱中用氯仿與甲醇的混合溶劑體系進(jìn)行梯度洗脫，得到洗脫液。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述氯仿與甲醇的體積比為1：(1～9)。