[發明專利]短須庫蠓的特異基因及其分子鑒定方法

在審

• 申請號: 201910177998.5
• 申請日: 2019-03-08
• 公開（公告）號: CN109810982A
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: 鄭愛萍;楊美瓊;林妙端;陳敏
• 申請（專利權）人: 福建國際旅行衛生保健中心（福建出入境檢驗檢疫局口岸門診部）
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/11;C12Q1/6869;C12Q1/6888
• 代理公司: 北京易捷勝知識產權代理事務所(普通合伙) 11613
• 代理人: 蔡曉敏

1.短須庫蠓的特異基因，其特征在于：所述特異性基因為COⅠ基因、Cyt b基因中的一種或兩種的組合，COⅠ基因的序列為SEQ ID NO.1，所述Cyt b基因序列為SEQ ID NO.2。

2.如權利要求1所述的短須庫蠓特異基因擴增引物，其特征在于：所述COⅠ基因的引物序列為：

正向引物：5’GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G 3’，

反向引物：5’TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA 3’。

3.如權利要求1所述的短須庫蠓特異基因擴增引物，其特征在于：所述Cyt b基因的引物序列為：

正向引物為：5’GGACAAATATCATTTTGAGGAGCWACAG 3’，

反向引物為：5’ATTACTCCTCCTAATTTATTAGGAATTG 3’。

4.一種短須庫蠓的分子鑒定方法，其特征在于，其包括以下步驟：將待測的昆蟲DNA序列，分別與短須庫蠓COⅠ基因和Cyt b基因序列同源性比對，當同源性均達到98％以上，則判斷為待測的昆蟲為短須庫蠓。

5.如權利要求4所述短須庫蠓的分子鑒定方法，其特征在于：所述昆蟲DNA分別采用COⅠ基因擴增引物和Cyt b基因擴增引物，進行擴增，分別得到COⅠ目的產物和Cyt b目的產物，進行測序后，再與短須庫蠓COⅠ基因和Cyt b基因同源性比對。

6.如權利要求4所述的短須庫蠓的分子鑒定方法，其特征在于，其包括以下步驟：

S1:從待測的昆蟲組織中分離提取DNA；

S2:將所提取得到的DNA為模板，采用COⅠ基因引物通過聚合酶鏈式反應擴增得COⅠ產物；

S3:將所提取得到的DNA為模板，采用Cyt b基因引物通過聚合酶鏈式反應擴增得Cyt b產物；

S4:將所得到的COⅠ產物和Cyt b產物分別經電泳分離檢測，若COⅠ產物分離得到大小為500～750bp的條帶，則保存為第一目的條帶；若Cyt b產物分離得到大小為400～500bp的條帶，則保存為第二目的條帶；

S5:將所得到的第一目的條帶和第二目的條帶分別測序得到第一序列和第二序列；若第一序列與SEQ ID NO.1的基因序列，且第二序列與SEQ ID NO.2的基因序列同源性均達到98％以上，則可判斷為待測的昆蟲為短須庫蠓。

7.如權利要求6所述的短須庫蠓的分子鑒定方法，其特征在于:所述COⅠ基因的引物序列為：

正向引物：5’GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G 3’，

反向引物：5’TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA3’。

8.如權利要求6所述的短須庫蠓的分子鑒定方法，其特征在于：所述Cyt b基因的引物序列為：

正向引物為：5’GGACAAATATCATTTTGAGGAGCWACAG 3’，

反向引物為：5’ATTACTCCTCCTAATTTATTAGGAATTG 3’。