[發明專利]啶蟲脒原藥對蚯蚓繁殖的毒性試驗方法

在審

• 申請號: 201910169097.1
• 申請日: 2019-03-06
• 公開（公告）號: CN109975534A
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發明（設計）人: 王彥華;柳新菊;楊桂玲;王新全;王菲迪;張昌朋;王強
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 苗艷榮

1.啶蟲脒原藥對蚯蚓繁殖的毒性試驗方法，其特征在于：包括以下步驟：

A、選取供試品和參比物質：選取97％啶蟲脒原藥為供試品，且選95％多菌靈為參比物質；

B、選取試驗儀器：BSA223S型電子天平、TSC-100型電子臺秤、JJ-5水泥膠砂攪拌機、Y112M-4攪拌機、SX-620型筆式pH計、KQ2200型超聲波清洗器、ZOGLABDSR-TH-RA型溫濕度記錄儀、移液槍、容量瓶、量筒和燒杯等；

C、選取供試生物：選擇赤子愛勝蚯蚓作為供試生物，且蚯蚓引入后在溫度為18.0℃-22.0℃，相對濕度為70％-90％，黑暗條件下進行飼養，試驗前，將選好的試驗蚯蚓要在人工土壤中馴養7d，馴養期間的食物與試驗期間的食物相同，試驗選用體重在0.300g-0.600g之間的二月齡以上蚯蚓，試驗用人工土壤由10％草炭、20％高嶺黏土、70％工業石英砂和0.1-0.3％碳酸鈣組成，充分混勻后待用；

D、調整試驗條件：試驗溫度為20±2℃，光照強度為400Lux–800Lux，光照∶黑暗時間比為16h∶8h，試驗開始后1d、8d、15d和22d，向每個容器添加約5.00g磨碎的燕麥片到土壤表面并用適量的水濕潤，成蚓在試驗開始后第28d移出，并向每個容器補充約5.00g食物，剩余時間不再飼喂，移出成蚓后，含有蚓繭的土壤在相同條件下繼續培養4周；

E、試驗濃度設計：試驗選取的97％啶蟲脒原藥以1.52mg a.i./kg_干土為最高濃度，按等比系數1.67設置1.52、0.910、0.545、0.326、0.195、0.117、0.070、0.042mg a.i./kg_干土共8個處理濃度，同時設置不加藥處理為空白對照；；

F、試驗溶液的配制：試驗溶液包括97％啶蟲脒原藥溶液和95％多菌靈原藥溶液，其配制步驟如下：

a、用BSA223S型電子天平稱取97％啶蟲脒原藥樣品0.500g于一次性塑料杯中，用自來水定容到100mL后，可得濃度為4850mg a.i./L的試驗母液，試驗時，用自來水稀釋至5.07、3.04、1.82、1.09、0.652、0.390、0.234、0.140mg a.i./L各試驗濃度；

b、用BSA223S型電子天平稱取一定量的95％多菌靈原藥樣品，用約10mL丙酮溶解后，再與10g石英砂混合均勻，然后將其置于通風櫥中，待丙酮揮發后再將其與490g土壤均勻混合，然后加水調節濕度到30％；

G、染毒：采用人工土壤混藥的方法，試驗時取各濃度藥液150mL加入到0.5kg人工土壤中，充分拌勻后調節土壤水分達到30％，然后將土壤轉入1000mL燒杯中，試驗開始時，將每組10條蚯蚓清洗后放在濾紙上去除多余水分，分別稱重后放入燒杯中，然后用保鮮膜封好杯口并用大頭針扎些小洞，一個燒杯為1重復，各處理設4個重復，每個重復10條蚯蚓，對照組設8個重復；

H、結果調查：試驗開始時稱量加入每個試驗容器成蚓的總體重，染毒4周后稱量每個試驗容器的存活成蚓的總體重，調查并記錄蚯蚓死亡情況，試驗結束時調查并記錄每個容器中幼蚓的數量；

I、采用DPS統計分析軟件，將蚯蚓繁殖毒性數據進行統計分析，求出EC₅₀和NOEC；

J、質量控制：試驗期間，每個重復的受試蚯蚓在試驗結束時繁殖的幼蟲數量≥30條；繁殖的變異系數≤30％；最初4周的成蚓死亡率≤10％；試驗結束時與試驗開始時含水量的變化率不能超過10％。

2.根據權利要求1所述的啶蟲脒原藥對蚯蚓繁殖的毒性試驗方法，其特征在于：所述步驟D中向每個容器添加大約5-6mL水。

3.根據權利要求1所述的啶蟲脒原藥對蚯蚓繁殖的毒性試驗方法，其特征在于：所述步驟I中DPS統計分析軟件的版本號為V14.10。

4.根據權利要求1所述的啶蟲脒原藥對蚯蚓繁殖的毒性試驗方法，其特征在于：所述步驟C中飼養期間，每間隔3-7d喂以磨碎的燕麥片。

5.根據權利要求1所述的啶蟲脒原藥對蚯蚓繁殖的毒性試驗方法，其特征在于：所述步驟E中多菌靈處理濃度為1.02mg a.i./kg_干土和5.10mg a.i./kg_干土。