[發明專利]一種優化的PCV2d ORF2基因及病毒樣顆粒的制備方法

在審

• 申請號: 201910161371.0
• 申請日: 2019-03-04
• 公開（公告）號: CN111647609A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 繆德年;夏葉;李春華;鄭琳琳;王宏華;黃冬;薄宗義;廖學文
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12N15/34
• 分類號: C12N15/34;C12N15/70;C07K14/01;C07K16/08
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種DNA，其特征在于，它編碼豬圓環病毒2d亞型Cap蛋白，并與SEQ ID NO 2的序列具有80％以上的相似度。

2.如權利要求1所述的DNA，其特征在于，所述的DNA的序列如SEQ ID NO 2所示。

3.一種質粒，其特征在于，該質粒是含有權利要求1所述DNA的表達載體。

4.一種蛋白，其特征在于，該蛋白的核酸編碼序列與SEQ ID NO 2的序列具有80％以上的相似度。

5.一種細胞，其特征在于，它含有權利要求1所述的DNA。

6.一種單克隆抗體，其特征在于，它能夠特異性結合權利要求4所述的蛋白。

7.如權利要求6所述的單克隆抗體，其特征在于，它通過使用權利要求4所述的蛋白免疫動物，制備雜交瘤并單克隆培養，獲得抗體。

8.一種單克隆抗體柱，其特征在于，它偶聯權利要求6所述的單克隆抗體。

9.一種Cap蛋白的制備方法，其特征在于，將權利要求1所述的DNA與表達載體連接，表達蛋白。

10.權利要求1所述DNA的應用，其特征在于，通過大腸桿菌表達系統制備病毒樣顆粒，制備步驟如下：

(1)將權利要求1所述DNA插入大腸桿菌表達載體，形成重組表達載體后，轉化入大腸桿菌表達宿主菌，構建表達工程菌；

(2)重組大腸桿菌表達工程菌分泌表達，得到可溶性Cap蛋白；

(3)利用單克隆抗體柱對所表達Cap蛋白進行純化，所得純化蛋白能形成病毒樣顆粒。

11.如權利要求10所述的應用，其特征在于，所述的大腸桿菌表達載體為pET28a(+)、pET30a(+)或者pET32a(+)。

12.如權利要求10所述的應用，其特征在于，所述的大腸桿菌表達宿主細胞為E.coliBL21(DE3)、E.coli BL21(DE3)pLySs或者E.coli Rosetta(DE3)。

13.如權利要求10所述的應用，其特征在于，所述的重組大腸桿菌表達工程菌分泌表達是指，取過夜培養的表達工程菌，接種于含有卡那霉素的LB液體培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.6～0.8；加入終濃度為0.0001-0.0005mol/L的IPTG，37℃誘導培養5h-7h。