[發明專利]體細胞親和靈芝菌株對共發酵生產強抗氧化活性多糖的方法

有效

• 申請號: 201910156893.1
• 申請日: 2019-03-01
• 公開（公告）號: CN109777847B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 劉盛榮;張維瑞;鄭世仲;阮俊峰
• 申請（專利權）人: 寧德師范學院
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明公布了一種體細胞親和靈芝菌株對共發酵生產強抗氧化活性多糖的方法。創新性的將體細胞親和的，但具遺傳差異以及多糖發酵的偏好碳源不同的2株靈芝菌株同時接入液體培養基中共發酵生產強抗氧化活性多糖（胞外）的方法。主要步驟為：制備靈芝菌株對的固體菌種、罐上兩菌共發酵以及沉淀法制備靈芝多糖。本發明共發酵靈芝多糖的抗氧化活性顯著高于單菌發酵，適合用于保健品和藥品生產。迄今為止，未見采用基于體細胞親和的靈芝共發酵生產多糖的方法，本發明具有極大的應用推廣前景。

技術領域

本發明屬于生物工程應用領域，涉及一種體細胞親和靈芝菌株對共發酵生產強抗氧化活性多糖的方法。

背景技術

靈芝 (Ganoderma lingzhi) 又稱為靈芝草、仙草、神芝，屬擔子菌綱、傘菌目、多孔菌科、靈芝屬真菌，是我國著名的一種中藥材，在我國和東南亞國家有幾千年的藥用歷史。我國古代《神農本草經》就記載靈芝具有扶正固本、滋補強壯、延年益壽等功效。現代研究證實靈芝具有廣泛的藥理作用，如抗腫瘤、免疫調節、抗氧化、降血脂、降血糖等作用。靈芝含有豐富的活性成分，如多糖、三萜、甾醇、核酸、蛋白質、維生素、微量元素等，其中多糖和三萜是靈芝活性的主要來源。目前，靈芝已廣泛用于保健品和藥品生產，在預防和輔助治療癌癥方面的成效極為顯著。

近年來，由于靈芝顯著的保健及藥用價值，市場需求不斷增長。目前，靈芝生產主要采用代料及短椴木栽培技術，可收獲靈芝子實體及其孢子。但栽培法具有一些明顯缺點，主要表現為生產周期長（通常需6個月以上），占地大，以及產品質量不穩定（如活性成分變化大）等，已成為靈芝產業健康發展的主要制約因素；此外，靈芝栽培需耗廢大量林木資源，不利于森林資源保護，因此，靈芝大規模栽培的發展模式難以為繼，開發新的靈芝生產方法十分必要。

與栽培法相比，靈芝液體發酵具有生產周期短、生產場所要求少、易工業自動化生產以及產品質量穩定等優點。尤其重要的是液體發酵法生產的靈芝多糖和三萜具有與子實體來源的多糖及三萜相近的生物活性，因此，靈芝液體深層發酵法作為一種新的靈芝生產方法得到人們認可，可作為栽培法之外的靈芝生產新方法，發展潛力大。

當前，靈芝液體發酵法主要用于靈芝多糖、三萜以及菌絲體生產，均采用單菌種接種的發酵方法，但產率偏低，難以達到工業化生產所要求的經濟效益，制約了靈芝液體發酵的工業應用，進一步開發高效的液體發酵方法顯得緊迫。通過前期實驗，即基于拮抗試驗從大量靈芝菌株中篩選體細胞親和的靈芝菌株，并分析其遺傳差異和多糖發酵的偏好碳源。本發明選擇體細胞親和、但具遺傳差異以及多糖發酵的偏好碳源不同的靈芝菌株對，將兩者同時接入液體培養基發酵生產多糖（胞外），與單菌種接種的發酵方法相比，可提高多糖產量且顯著提高其抗氧化活性。本發明是一種全新的靈芝液體發酵生產靈芝多糖的方法，且所生產的靈芝多糖具有強抗氧化活性，該發酵方法具有極大的推廣應用前景。

發明內容

本發明提供了一種不同于常規的采用單一靈芝菌株接種的靈芝液體發酵方法，創新性的將體細胞親和的，但具遺傳差異以及多糖發酵的偏好碳源不同的2株靈芝菌株同時接入液體培養基中共發酵生產強抗氧化活性多糖（胞外）的方法。

一種體細胞親和靈芝菌株對共發酵生產強抗氧化活性多糖的方法，包括以下步驟：

（1）制備靈芝菌株對的固體菌種；所述靈芝菌株對由體細胞親和的NA8菌株Ganoderma lingzhi CICC 14021 和NA16菌株 Ganoderma lingzhi CICC 14027組成；

（2）接種、罐上發酵及多糖回收。

步驟（1）所述制備靈芝菌株對的固體菌種的方法為：將保藏的菌種接種至斜面PDA培養基，28℃培養5-7 d，切取1 cm²活化的菌種塊接種至滅過菌的固體培養料，培養料裝于三角瓶中， 在25℃，60%相對濕度的暗環境培養，菌絲吃料完全后即獲得固體菌種。