[發明專利]一種用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段、擴增引物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201910156403.8
• 申請日: 2019-03-01
• 公開（公告）號: CN109666761B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發明（設計）人: 沙濤;楊小雨;張亞平;王丁卉;何志紅
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6806;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 代芳

本發明提供了一種用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段、擴增引物及其制備方法和應用，屬于生物技術和酶工程技術領域。所述用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。用于擴增干巴菌鑒定的特異性DNA片段的引物，包括158F引物和437R引物。所述用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段、擴增引物或制備方法得到的干巴菌特異性DNA片段在特異性鑒定干巴菌中的應用，具有快速、準確地完成鑒定干巴菌的特點。

技術領域

本發明屬于菌種分子鑒定技術領域，具體涉及一種用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段、擴增引物及其制備方法和應用。

背景技術

野生食用菌是一種重要的森林資源，在綠色食品開發、生物制藥、環境保護等行業中發揮著重要的作用，特別是生長在林區的一些野生食用菌。干巴菌屬擔子菌門(Basidiomycota)、革菌科(Thelephoraceae)、革菌屬(Thelephora)，多生長于滇中和滇南海拔600～2300m的松林中，是能與多種松科植株共生的外生菌根真菌。干巴菌是云南省比較有特色的野生食用菌，口感獨特，具有類似牛肉干的香味，營養豐富，具有很高的營養價值和經濟價值。已有報道從干巴菌中分離出新的化合物具有較高的抗氧化及抗癌活性，證明其具有潛在的藥用價值。

目前，人們主要根據野生食用菌子實體的形態學、解剖學等特征來確定野生食用菌的分類及其菌絲體分離物的鑒定。野生食用菌不產生子實體或尚未找到子實體時，就無法進行野生食用菌菌種的鑒定。即使是從野生食用菌的子實體上分離到純菌種，為避免伴生菌和雜菌的污染所產生的誤導，也應遵循柯赫法則進行回接試驗，產生相同子實體的鑒定方法是令人信服的。遺憾的是現在很多珍貴的野生食用菌，暫時不能進行人工栽培出菇，在這種情況下就很難斷定分離菌株的真偽。干巴菌可以通過成熟子實體的外觀區來確定物種，但無法通過菌絲來確定。DNA作為遺傳物質能客觀和真實地反應物種之間的親緣關系，對于菌種鑒定是一種有力的依據和補充。以DNA分子為基礎的特異性PCR技術是一種對分離純培養的菌株鑒別的高效、快速而又可靠地方法，已廣泛地應用在真菌分離培養物的真偽鑒定方面。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種來源于用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段、擴增引物及其制備方法和應用，所述特異性DNA片段為首次提出，具有鑒定準確率高的特點。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段，所述用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

本發明提供了一種用于擴增用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段的引物，包括158F引物和437R引物；所述158F引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示；所述437R引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.3所示。

本發明提供了一種用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段的制備方法，包括以下步驟：

(1)提取干巴菌的基因組DNA；

(2)以所述步驟(1)中提取的基因組DNA為模板，用所述的引物進行PCR擴增，得到擴增產物；

(3)將所述步驟(2)中擴增產物切膠回收，得到用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段的DNA片段。

優選的，所述PCR擴增的體系為PCR擴增MIX液22.5μl，158F 1μl，437R 1μl和DNA10μl。

優選的，所述PCR擴增的程序：98℃預變性2min；然后98℃變性20s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共35次循環；最后72℃延伸5min。

本發明提供了所述用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段、所述的引物、所述的制備方法制備得到的用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段在鑒定干巴菌中的應用。