[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段、擴(kuò)增引物及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910156403.8
• 申請(qǐng)日: 2019-03-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109666761B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沙濤;楊小雨;張亞平;王丁卉;何志紅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 云南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6806;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 代芳

1.一種用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段，其特征在于，所述特異性DNA片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

2.一種用于擴(kuò)增權(quán)利要求1所述的特異性DNA片段的引物，其特征在于，包括158F引物和437R引物；所述158F引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示；所述437R引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.3所示。

3.一種權(quán)利要求1所述的用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取干巴菌的基因組DNA；

(2)以所述步驟(1)中提取的基因組DNA為模板，用權(quán)利要求2所述的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到擴(kuò)增產(chǎn)物；所述PCR擴(kuò)增的體系為PCR擴(kuò)增MIX液22.5μl，158F 1μl，437R 1μl和DNA 10μl；所述PCR擴(kuò)增的程序：98℃預(yù)變性2min；然后98℃變性20s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共35次循環(huán)；最后72℃延伸5min

(3)將所述步驟(2)中擴(kuò)增產(chǎn)物切膠回收，得到一條長(zhǎng)度為280bp的用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段。

4.權(quán)利要求1所述用于干巴菌鑒定的特異性DNA片段、權(quán)利要求2所述的引物、權(quán)利要求3所述的制備方法制備得到的特異性DNA片段在鑒別干巴菌中的應(yīng)用。