[發明專利]一種多激素聯合定量檢測卡及其制備方法和使用方法

在審

• 申請號: 201910156300.1
• 申請日: 2019-03-01
• 公開（公告）號: CN109752538A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 周輝
• 申請（專利權）人: 周輝
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/58;G01N33/533
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

本發明公開了一種多激素聯合定量檢測卡及其制備方法和使用方法，包括底卡和面卡，所述底卡上設有：加樣區，與加樣區連接的多個結合區，通過時間閥與結合區一一對應連接的多個檢測區；與檢測區一一對應連接的廢液區；所述結合區及檢測區的底部均并聯有微通道；所述微通道連接時間閥；所述面卡上設有加樣孔和觀察孔，加樣孔的位置與底卡加樣區對應，觀察孔的位置與底卡檢測區對應。本發明通過微流控技術控制待測樣品的流速和流量，具有同一種標志物的多激素通過一條微通道進入檢測區，避免相互干擾，從而減少誤差，增加反應靈敏度；將待測樣品制備成水包水微液滴，增大檢測限度。

技術領域

本發明涉及微流控技術和免疫熒光微球免疫層析技術相結合的技術領域，具體涉及一種多激素聯合定量檢測卡及其制備方法和使用方法。

背景技術

睪酮作為性激素的一種，是臨床激素六項檢測種的重要組成部分。睪酮是廣泛存在于人和動物體內的一種類固醇類激素，準確檢測其在生物體內的含量，在判斷其生殖性能、正常生理指數及病理濃度而用于疾病診治、計劃生育、動物繁育等方面都有重要的作用。男性體內睪酮由睪丸間質細胞產生，男性血清中睪酮含量是證實可疑睪丸功能紊亂，證明雄性激素缺乏以及檢測睪酮代替治療的最重要的檢測數據。女性體內睪酮主要在卵巢中合成，也在腎上腺皮質內合成，女性血清中的睪酮含量用于確定女性雄性激素過多癥。

雌二醇主要由卵巢或黃體分泌，一般在促卵泡激素和黃體生成素的作用下，經過卵泡膜細胞和顆粒細胞的協調作用合成得到雌二醇。雌二醇促使輸卵管黏膜上皮細胞分泌活動增加和纖毛生長加快，促進受精卵經輸卵管運行至子宮腔。當血清雌二醇水平下降時，受精卵經輸卵管運行至子宮腔的時間延長，導致孕卵停留于輸卵管的時間較長，從而增加了胚泡著床于輸卵管的概率。

催乳素是由垂體和垂體外細胞產生的一種神經肽類蛋白激素，可表達于腺垂體的泌乳素細胞、蛻膜化的子宮內膜、卵巢組織、胸腺等，催乳素除參與乳汁合成并對生殖行為等發揮作用外，還具有潛在的免疫功能。催乳素在維持黃體與生長因子兩方面的作用與生殖關系密切相關，提高子宮內膜容受性。催乳素及其受體對胚泡植入和妊娠維持是必要的，研究發現一定濃度的催乳素可促進子宮內膜細胞的生長和黏附，影響著床和胚胎發育。

微流控技術(Microfludics)是指在至少有一維為微米甚至納米尺度的低維通道結構中控制體積為皮升至納升的流體進行流動并傳質、傳熱的技術。實現微流控的主要方法就是將流體限制在一個微米甚至納米尺度的低維通道中，流體在微通道中具有獨特的流體性質，如層流、液滴等等。當微通道在微米甚至納米尺度時，微通道表面積與其內部體積比很大，通道的結構、形狀和壁面性質都對流體的流動狀態產生極大影響。因此，微流控可以實現一系列常規方法難以完成的微加工和微操作。時間閥的作用就是在固定的時間內控制通過微通道的流體的流速和流量，可以嚴格控制整個反應的時間并且控制進入檢測區的流體的量。

熒光微球是指將熒光團通過包埋、共價鍵連接等方式引入有機或無機納米粒子中，并讓納米粒子承擔有機小分子熒光染料的檢測、標記等功能，具有相對穩定的形態結構以及發光行為。熒光定量免疫層析技術，是免疫熒光技術和傳統免疫層析技術相結合發展創新的一種定量新型檢測技術。該技術在保留膠體金免疫層析技術操作簡便、檢測快速、便攜性強的優點外，還通過熒光示蹤增強技術實現了檢測結果的精確定量。